《特異性4-1BBL+B7-1+T細胞過繼免疫治療人腦膠質瘤的實驗研究》是依託中山大學，由牟永告擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：特異性4-1BBL+B7-1+T細胞過繼免疫治療人腦膠質瘤的實驗研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：牟永告
- 依託單位：中山大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
腦膠質瘤發病率高，傳統措施療效差，免疫治療是理想的新方法，但我們前期研究發現NDV瘤苗及CIK細胞過繼免疫治療效果有限，如何增強T細胞的抗腫瘤作用是免疫治療成功的關鍵。4-1BBL和B7是T細胞活化的重要共刺激分子，4-1BBL在T細胞免疫應答中具有強大的放大效應，而B7表達是T細胞活化的必要條件，但我們進一步實驗發現膠質瘤細胞不表達B7-1。本課題旨在人為提供B7-1共刺激信號誘導腫瘤特異性T細胞活化，用4-1BBL信號增強T細胞的增殖和效應。擬將人4-1BBL基因和B7-1基因轉染入T細胞，製備4-1BBL+B7-1+ T細胞；然後與膠質瘤細胞共培養，無需其他APC存在的條件下刺激T細胞活化並擴增膠質瘤特異性T細胞；最後通過體內外實驗觀察4-1BBL+B7-1+ T細胞對膠質瘤的治療作用。本研究為製備大量高效的膠質瘤特異性T細胞提供新方法，籍此提高膠質瘤過繼免疫治療的療效。
結題摘要
目的 建立4-1BBL+B7-1+T細胞擴增系統，增強其特異性T細胞的殺瘤活性。對荷瘤的膠質瘤小鼠進行過繼免疫治療，籍此提高膠質瘤免疫治療的療效。同時對4-1BBL和B7-H4等分子在人腦膠質瘤中的表達進行研究。方法 構建表達人4-1BBL基因的重組逆轉錄病毒載體，並和B7-1基因的逆轉錄病毒載體共轉染人T細胞，製備4-1BBL+B7-1+T細胞。通過免疫磁珠分離獲得CD3+T細胞，將其按1:1 的比例加入已貼壁生長的膠質瘤細胞株T98G和自體瘤原代培養的單層細胞中，體外誘導膠質瘤特異性T細胞活化與擴增。以培養中第14、18、24天的T細胞作為效應細胞，T98G膠質瘤細胞株或自體瘤細胞為靶細胞，用4小時51Cr釋放實驗檢測其殺傷活性，用ELISA雙抗夾心法檢測IFN-γ的分泌量。將4-1BBL+B7-1+ T細胞過繼轉移給荷瘤的SCID鼠，從整體水平觀察4-1BBL+B7-1+T細胞對已形成的膠質瘤的治療作用。並且使用免疫組化方法對4-1BBL和B7-H4等分子在人腦膠質瘤中的表達進行檢測。結果 成功構建了重組4-1BBL基因的逆轉錄病毒載體，與實驗室已構建的B7-1基因的逆轉錄病毒載體共轉染人T細胞。FACS結果顯示共轉染細胞的4-1BBL基因和B7-1基因明顯上升。經FACS證明其為效應T 細胞。發現4-1BBL+B7-1+T細胞作為效應細胞，T98G膠質瘤細胞株或自體瘤細胞為靶細胞時，18天培養，靶比值為100：1時，殺傷活性最佳。已成功構建荷膠質瘤 SCID 鼠模型。人膠質瘤的研究發現4-1BBL 和B7-H4在年輕膠質瘤患者表達率較高。結論 本研究為製備大量高效的膠質瘤特異性T細胞提供了新方法。4-1BBL和B7-1基因共轉染的T細胞，經膠質瘤細胞株或自體瘤原代培養細胞體外誘導其活化與擴增，能有效殺傷對應的膠質瘤靶細胞。4-1BBL和B7-H4在判斷膠質瘤患者的預後方面有參考價值。
