牛腫瘤壞死因子-α ELISA 試劑盒

大鼠、人、小鼠、豚鼠、牛、豬、馬、雞等各種ELISA試劑盒及各種動物的血清和各種抗原抗體，產品種類繁多、貨物齊全。牛腫瘤壞死因子α（TNF-α）ELISA檢測

產品簡介

產品名稱：牛腫瘤壞死因子-αELISA試劑盒(bovine TNF-αELISA Kit)

靈敏度：6.3pg/mL

檢測範圍：125-8000 pg/ml

分析時間：4h

樣品類型：血漿、血清、細胞培養上清液

樣品用途：此試劑盒只用於牛腫瘤壞死因子-α的檢測

試劑盒保存溫度：2-8℃

產品圖片

牛腫瘤壞死因子-α ELISA 試劑盒

前沿介紹

腫瘤壞死因子-α是一類主要由巨噬細胞分泌的多功能細胞因子，在炎症反應、細胞凋亡及免疫系統發育過程中起著關鍵作用。TNF-α主要由巨噬細胞分泌，但其他類型的細胞如CD4+淋巴細胞，NK細胞、神經元細胞也能夠分泌。

實驗原理

本試劑盒採用雙抗體夾心法測定標本中牛腫瘤壞死因子-α的水平。用純化的牛腫瘤壞死因子-α抗體包被微孔板，製成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入牛腫瘤壞死因子-α，再與牛腫瘤壞死因子-α抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體複合物，經過徹底洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的牛腫瘤壞死因子-α呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中牛腫瘤壞死因子-α濃度。

試劑盒組成

試劑盒組成	48 孔配置	96 孔配置	保存
說明書	1 份	1 份
封板膜	2 片（48）	2 片（96）
密封袋	1 個	1 個
酶標包被板	1 × 48	1 × 96	2 -8℃保存
標準品	0.5ml × 1瓶	0.5ml × 1瓶	2 -8℃保存
標準品稀釋液	1.5ml × 1瓶	1.5ml × 1瓶	2 -8℃保存
酶標試劑	3 ml × 1瓶	6 ml × 1瓶	2 -8℃保存
樣品稀釋液	3 ml × 1瓶	6 ml × 1瓶	2 -8℃保存
顯色劑A液	3 ml × 1瓶	6 ml × 1瓶	2 -8℃保存
顯色劑B液	3 ml × 1瓶	6 ml × 1瓶	2 -8℃保存
終止液	3ml × 1瓶	6ml × 1瓶	2 -8℃保存
20 倍濃縮洗滌液	20ml × 1瓶	30ml × 1瓶	2 -8℃保存

樣本處理及要求

1. 血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉澱，應再次離心。

2. 血漿：應根據標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘後，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉澱形成，應該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用 PBS（ PH7.2-7.4 ）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到 100 萬 /ml 左右。通過反覆凍融，以使細胞破壞並放出細胞內成份。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。

5. 組織標本：切割標本後，稱取重量。加入一定量的 PBS ， PH7.4 。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化後仍然保持 2 -8 ℃的溫度。加入一定量的 PBS （ PH7.4 ），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清。分裝後一份待檢測，其餘冷凍備用。

6. 標本採集後儘早進行提取，提取按相關文獻進行，提取後應儘快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放於 -20 ℃保存，但應避免反覆凍融 。

7. 不能檢測含NaN3的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（ HRP ）活性。

操作步驟

實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時儘量避免起泡。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋後的樣品符合試劑盒的檢測範圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數。
1.標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標準品100μl，然後在第一、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然後從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻後從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻後從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻後從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋後各孔加樣量都為50μl，濃度分別為180 ng/L，120 ng/L，60 ng/L，30ng/L，15ng/L)。

2.加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加於酶標板孔底部，儘量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板後置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋後備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩乾，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複5次，拍乾。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震盪混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液後15分鐘以內進行。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘後方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在 5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD 值大於標準品孔第一孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（ n 倍）後再測定，計算時請最後乘以總稀釋倍數（ ×n×5 ）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準 .
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。