激素測定法 （methods of hormone determina-tion）對體液或組織中激素含量的測定方法。按照世界衛生組織分類原則，可把激素測定方法分為生物鑑定，化學測定，蛋白結合測定和細胞化學測定4類。 放射免疫測定法雖然靈敏度高，操作方便，但所測結果不能完全代表激素的生物活性，因為激素分子的免疫活性中心和生物活性中心往往是不一致的。近年有人發展了一種細胞化學測定方法，大大推進了測定技術的發展。
基本介紹
- 中文名：激素測定法
- 外文名：methods of hormone determina-tion
- 含義：對體液或組織中激素含量的測定
- 特點：活體注射
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生物鑑定
概況
以樣品中所含激素引起動物的某些特異生物反應為基礎的測定方法。是20世紀20年代發展起來的。例如，胰島素降低血糖；雄激素引起閹雞雞冠生長；雌激素使嚙齒類動物陰道上皮角質化；甲狀腺激素可以促進蝌蚪變態等。
特點
生物鑑定有兩個特點：①活體注射；②以生物反應作為鑑定指標。因此，對鑑定條件的嚴格控制十分重要。如給藥途徑、注射劑量、溶劑和懸浮液的性質，動物種類、年齡、性別和健康狀況等。此外，所選終點反應指標應為特異反應。如腎上腺素能升高血糖，但不能依此指標來鑑定腎上腺素。因為胰高血糖素、促腎上腺皮質素、腎上腺皮質激素也可通過不同作用途徑引起血糖上升。此外，各種激素在體內的反應可能是多途徑的；不同動物對同一激素的反應也可能有所不同。由於這些複雜情況在選擇生物鑑定的最終反應指標時，必須要考慮其客觀性、精確性、靈敏性、特異性、重複性和方便性。測定技術應立足於儀器的客觀測定，而不是依賴於主觀估計。如性甾體激素能改變人的體型和毛髮分布，但這些指標難以客觀測定。
優缺點
生物鑑定的優點是反應特異的生物活性，能真正代表激素的生物效應，所以它是一切測定方法的基礎。生物鑑定的缺點是靈敏性差；動物用量大；實驗延續時間長，難以鑑定多量樣品。
化學測定
20世紀40年代隨著化學技術的發展，對一些小分子激素（如甾體激素）的分子結構以及它們的代謝產物有了比較明確的了解，在此基礎上發展起來的以激素或代謝產物分子上的特異基團同某種試劑的顯色反應為基礎的測定方法。它只能測定一些小分子化合物，靈敏度比生物鑑定高但操作程式複雜，使用不普遍。
蛋白結合測定
目前最通用的一種激素測定方法，也是命名最混亂的一種測定方法。通常用的免疫測定法，放射免疫測定法，受體結合測定法和血漿蛋白結合測定法，都屬於這一類測定方法。世界衛生組織根據其測定原理對蛋白結合測定法提出新的分類標準和統一命名。這些分類標準包括：①在測定中是否需要標記物；②標記的是被測物還是結合蛋白；③在測定系統中被測物過量還是結合蛋白過量；④測定的是被測物本身（直接法）還是結合蛋白（間接法）；⑤在測定系統中是否需要分離步驟。
測定方法
據上述標準，以免疫測定為例，介紹幾種測定方法：
免疫測定法
不用標記物的蛋白結合測定法——免疫測定法 基於被測物（抗原）與其特異結合蛋白（抗體）結合時所出現的沉澱線作為測定指標的，在測定系統中加入的抗體是過量的。操作較為迅速和方便。但這一測定法只適應於測定大分子物質，被測物的濃度較高，只有這樣才形成能用肉眼看到的抗原-抗體複合物，這類方法套用較少。
放射免疫測定法
標記抗原的免疫測定法——放射免疫測定法 這是以標記抗原和未標記抗原與同一抗體的競爭性結合反應為基礎的。
隨著未標記抗原增加，在反應系統中複合物中標記的抗原越來越少，因而在儀器上所測到的放射性記數也越來越少，由此可以作出一條標準曲線，並從標準曲線上查出被測樣品的含量。放射免疫測定法既能測定蛋白質類的大分子物質，也能測定半抗原一類的小分子物質。放射免疫測定法的靈敏度高，樣品用量少，並便於自動化操作。放射免疫測定法屬結合蛋白（抗體）限量測定，標記的是被測物（抗原），所以它屬於直接測定。
免疫放射計量測定法
標記抗體的免疫測定——免疫放射計量測定法 這是標記特異抗體。在反應系統中加入過量的標記抗體以便使全部被測抗原與之結合，然後，將結合和未結合的抗體分開。用吸附劑除去未結合的抗體，因此最後在儀器上測到的是結合型的抗體，這是一種間接測定，並且是一種過量蛋白結合試劑測定法。它與放射免疫測定法有本質上的區別。過量蛋白結合試劑測定法反應迅速，反應更為靈敏，但特異性較差。為了克服這一不足，有人發展了一種夾心麵包免疫放射計量測定法，大大提高了特異性和靈敏度。
非同位素標記的免疫測定 除用同位素作標記物之外，還有許多化合物可用作標記物。如酶、螢光素、病毒、金屬、紅細胞、乳酸和其他許多特異顯色顆粒。非同位素免疫測定的命名可按放射免疫命名的格式來表示。如：放射免疫測定、酶免疫測定、螢光免疫測定和病毒免疫測定等。
用非同位素標記抗體的免疫計量測定，也可仿照免疫放射計量測定法的命名來表示。如：免疫酶計量測定；免疫螢光計量測定。
以上僅僅以抗體作為結合試劑為例命名，對以其他結合蛋白為結合試劑相似的測定，也可以同樣格式命名。
猝滅測定
不經分離步驟的免疫測定法——猝滅測定 差不多所有標記測定法都需要一種適當的分離步驟，以便把反應系統中最終的結合型和游離型標記物分開進行測定。但是分離步驟會導致偏差，影響測定結果。有些分離技術需要熟練的技巧。猝滅型測定法一般用於測定半抗原化合物。其基本原理是，先將標記物——酶與半抗原分子結合，當抗原同酶結合後在空間構型上發生變化，此抗原與抗體結合後其酶不再同底物發生作用，酶的活性失效（或稱作猝滅）。
細胞化學測定
許多激素在其靶細胞中，可直接或間接引起一系列氧化還原反應，不同劑量的激素在靶細胞中所引起的反應程度（或狀態），可以通過某種組織化學和細胞化學方法（對特異酶或反應底物的顯色反應）顯示出不同程度的染色，這些染色反應可通過非常靈敏的儀器（微光密度測定儀）定量地記錄下來，這就是細胞化學測定法的基本原理。
細胞化學測定，實際上是一種生物測定法，但是，它兼有放射免疫測定法和生物測定法的雙重優點，其靈敏度比放射免疫測定法高500～1000倍。血液樣品可作1∶100或1∶1000稀釋，每次測定血液用量極微。在測定技術上，現已開始用組織切片來代替組織塊，大大提高了測定效率。此方法的缺點是延續時間長，並要用貴重儀器和消耗大量乾冰，所以難以推廣。
