漢坦病毒包膜糖蛋白與宿主細胞相互作用的新受體研究

《漢坦病毒包膜糖蛋白與宿主細胞相互作用的新受體研究》是依託武漢大學，由羅凡擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：漢坦病毒包膜糖蛋白與宿主細胞相互作用的新受體研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：羅凡
• 依託單位：武漢大學

項目摘要

我們通過前期實驗發現：漢坦病毒感染人胚肺細胞時除通過整合素介導外還存在其他病毒受體。在此基礎上，本項目擬採用Biotinylation技術分離得到人胚肺細胞胞膜的表面蛋白組分；同時構建帶有標記的漢坦病毒包膜糖蛋白G（G1、G1-G2）的表達載體，體外誘導表達和純化；然後通過免疫共沉澱方法篩選人胚肺細胞上的病毒新受體；最後套用流式細胞術/免疫螢光技術檢測病毒新受體在HV易感細胞上的表達和是否能導致非易感細胞感染，鑑別和確定所得的病毒新受體。該研究將探尋與確定人胚肺細胞上可能存在的HV新受體，從而為深入探討HV與靶細胞間的相互作用和揭示HV的分子致病機制提供新依據。

結題摘要

目前我國由漢坦病毒（Hantavirus, HV）感染所導致的急性傳染性疾病---腎綜合徵出血熱的流行現狀依然嚴峻，但對於其發病機制迄今尚未闡明。已知病毒與宿主細胞膜上特異性受體結合是病毒感染細胞的起始環節，對於病毒能否成功感染具有重要意義。因此，研究病毒特異性受體將有助於闡明病毒的致病機制。現有關於漢坦病毒受體的研究主要集中在細胞膜粘附蛋白β3整合素上，而本課題組前期研究結果顯示錶皮生長因子受體（EGFR）也參與了HV致病過程，但具體作用機制尚不清楚。為此，我們深入探討了EGFR在漢坦病毒感染宿主細胞中的具體作用及機制。主要結果：（1）採用篩選出的對EGFR表達抑制效率最高的EGFR siRNA作用宿主細胞後再感染漢坦病毒，發現細胞表面EGFR表達量的降低直接導致病毒感染的下降。 （2）構建人EGFR的真核表達質粒並穩定轉染漢坦病毒非易感細胞，建立了細胞膜上穩定表達EGFR的細胞系CHO-EGFR，再接種病毒後發現非易感細胞獲得了對漢坦病毒的易感性，可以被漢坦病毒感染。（3）EGFR的配體EGF與漢坦病毒同時作用宿主細胞，EGF與EGFR的結合可使EGFR胞內結構域酪氨酸蛋白激酶活化，從而促進了宿主細胞對HV的攝取，直接導致細胞內病毒核酸水平升高；而EGF預處理宿主細胞致使細胞表面的EGFR發生內化，數量降低，導致病毒感染下降。（4）套用不同濃度酪氨酸蛋白激酶抑制劑Genistein預處理宿主細胞不同時間後再接種病毒，Genistein可透過細胞膜抑制酪氨 酸蛋白激酶活性，使EGFR內化降低，從而導致病毒感染受阻，且預作用時間越長或濃度越高，病毒感染的陽性率越低，存在明顯時間效應和量效關係。本研究明確了EGFR是作為病毒受體參與到漢坦病毒感染宿主細胞過程，這為探討HV入侵機制和致病機制提供了新的思路，並為抗病毒藥物靶點的設計提供重要理論依據。本課題發表相關學術論文2篇，會議摘要2篇，參加國內學術會議交流6次；培養博士生1名、大學生3名。