活細胞的螢光相關光譜單分子研究

《活細胞的螢光相關光譜單分子研究》是依託上海交通大學，由董朝青擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：活細胞的螢光相關光譜單分子研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：董朝青
• 依託單位：上海交通大學

項目摘要

本項目旨在目前實驗室建立的螢光相關光譜系統的基礎上，克服共聚焦螢光掃描顯微鏡通常採用的光學掃描的缺點，組裝一套由載物台二維掃描（x, y）和物鏡一維掃描(z)組成的三維掃描系統，形成具有納米位移精度的三維成像和螢光相關光譜單分子檢測系統，實現對活細胞的三維掃描成像和原位的螢光相關光譜單分子檢測分析。採用螢光相關光譜方法對目標分子（如葉酸功能化的螢光量子點和量子點標記的抗表皮生長因子抗體等）在細胞內部的分布，擴散，遷移以及與受體或其它分子的相互作用機理加以研究。建立一種目標分子在腫瘤細胞的生長和發育過程中濃度變化，分布變化和遷移，以及與其它分子作用模式研究的單細胞分析方法，從而促進細胞生物學、腫瘤學、遺傳學、生物醫學等領域的研究。

結題摘要

通過最佳化光學構型等因素，建立了螢光相關光譜單分子檢測系統，並將該系統與載物台三維掃描系統聯用，構建了一套基於載物台三維掃描成像和螢光相關光譜單分子檢測系統。該系統可用於腫瘤活細胞內目標分子的實時單分子探測研究，並建立了活細胞的單分子/單顆粒探測新方法。克服常規的水相合成工藝無法合成長鏈巰基化合物為配體的水相量子點的缺點，建立了一種以長鏈巰基化合物為配體輔助微波加熱合成水相量子點的新方法。該量子點具有光穩定性好，易於生物連線等優點，可用於細胞內生物分子單分子檢測的螢光標記。建立了量子點與生物分子連線和表征的新方法。建立了多肽在腫瘤活細胞的細胞膜，細胞中的濃度分布和擴散動力學研究方法。水相合成量子點經腫瘤細胞受體特異性結合作用進入細胞後，採用建立的單顆粒探測方法研究了不同配體類型，不同尺寸的量子點在腫瘤細胞中的濃度分布和動力學行為，闡析了它們在細胞中不同於其它納米粒子的內吞途徑。同時，為了克服常規的單“點”的螢光相關光譜方法在用於細胞膜這種非均質體系時的不足，採用貴金屬納米粒子為探針，建立了一種空間分辨共振光散射相關光譜（SRSCS）單顆粒檢測新方法。