《沙眼衣原體檢測血清學標誌物的優選與驗證》是依託天津醫科大學，由齊蔓莉擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：沙眼衣原體檢測血清學標誌物的優選與驗證
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：齊蔓莉
- 依託單位：天津醫科大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
泌尿生殖道沙眼衣原體（Ct）感染已居於全球和我國性病首位，併發症多且嚴重。其感染在全球迅速增長的根源是大量感染者沒有症狀，成為重要儲主和傳染源。至今尚無有效的疫苗。歐洲已開發國家經驗顯示開展Ct篩查並及時治療是控制傳播的有效途徑，然而我國現有的檢測方法由於敏感性偏低或結果判讀不客觀等原因均不適用於篩查。本課題在前期基礎上,高效表達候選蛋白，套用酶聯免疫吸附技術，對Ct感染的血清標誌物進行重新選擇和最佳化，通過對照金標準，確定具有最高敏感性和特異性的標誌物組合，充分提高檢測準確性。將建立的方法進一步擴大規模套用，觀察其穩定性，初步評價套用價值。本研究採用重組抗原解決了抗原來源困難和污染的問題，成本低廉，在檢測中以2-4種標誌物為組合抗原，保證檢測特異性不低於現有方法而敏感性顯著提高，更好滿足Ct篩查的需要。本研究能夠為改進我國Ct檢測方法和開發篩查試劑奠定實驗基礎，對Ct感染的疾控具有積極作用。
結題摘要
泌尿生殖道沙眼衣原體（Ct）感染已居於全球和我國性病首位，併發症多且嚴重。其感染迅速增長的根源是存在大量沒有症狀的潛伏感染者。歐洲已開發國家經驗顯示開展Ct篩查並及時治療是控制傳播的有效途徑，然而我國現有的檢測方法由於敏感性偏低或結果判讀不客觀等原因均不適用於篩查。為了尋找適合開展Ct篩查的更為敏感和特異的候選蛋白，本課題在前期基礎上, 選擇5個抗原性最強的蛋白（CPAF、OmcBc、CT841、CT143、CT101）保證檢測的高敏感性，同時選擇兼具較強抗原性和特異性的5個目標蛋白（pgp3、TARP、CT813、IncA和CT875），以保證檢測的高特異性，同時選擇沙眼衣原體主外膜蛋白（MOMP）和熱休克蛋白60（Hsp-60）作為對照抗原。收集100名性病門診經直接免疫螢光法診斷的泌尿生殖道沙眼衣原體感染患者的血清和50名性病門診經直接免疫螢光法除外了沙眼衣原體感染者的血清，用於微量免疫螢光和ELISA檢測，同時收集該100名感染有衣原體者的宮頸/尿道拭子用於衣原體培養。表達上述蛋白後，包被ELISA板，同時設陽性對照和陰性對照，對上述血清進行相應抗體的檢測，同時以微量免疫螢光和衣原體培養兩種“金標準”作為對照。最終選定Pgp3、CT694、CT875為最佳化血清標誌物組合，與微量免疫螢光的陽性符合率達到98.78%。製備Pgp3、CT694、CT875三種蛋白的單克隆抗體。套用建立的方法，對300名15～40歲的非性病門診性活躍人群進行血清沙眼衣原體抗體的篩查，並與微量免疫螢光法作對照，共篩出衣原體感染陽性者63例，沙眼衣原體感染總陽性率21%。63例ELISA法陽性結果血清中，62例微量免疫螢光法結果陽性，1例陰性。237例ELISA陰性結果血清中，234例微量免疫螢光結果陰性，3例陽性。以MIF法為標準，3種免疫優勢蛋白組合篩選檢測的敏感度為95.38%（62/62+3），特異度為99.57%（234/234+1）。本研究採用重組抗原解決了抗原來源困難和污染的問題，成本低廉，更好滿足Ct篩查的需要。本研究為改進我國Ct檢測方法和開發篩查試劑奠定了實驗基礎，對Ct感染的疾控具有積極作用。
