正交交變電場凝膠電泳，兩交變電場的電流方向相互垂直。
基本介紹
- 中文名：正交交變電場凝膠電泳
- 外文名：orthogonal fieldalternatinggelelectrophoresis
正交交變電場凝膠電泳(OFAGE)，兩交變電場的電流方向相互垂直。
交變電場凝膠電泳將10×10cm玻璃板放在模子內，倒入40ml0.5×tbe的1.5﹪瓊脂糖溶膠，插入梳子，待膠充分凝固後，取出凝膠（連同玻璃板），放在正在交變電場凝膠電泳槽中。加1500–2000ml0.5×TBE緩衝液（1×TBE=90mMTris,90mM硼酸2.5mMNa2H2EDTA,ph8.2）液面高1.5–1.7cm.。將DNA樣品加入凝膠井孔內，包埋樣品切成合適大小的膠條插入井孔中，每一井孔約加
DNA0.5–1ug。將電泳槽兩對正負電極分別與此交變電場電泳儀的左右正負電源輸出接通。選擇適當的電壓強度和交變時間，電泳槽置於冷室或通冰水冷卻，電過程緩衝液溫度維持在14℃。電泳完畢，取出凝膠，在0.5×TBE含1ug/ml菲啶嗅紅溶液中浸泡20分鐘，用0.5×TBE洗，然後在紫外燈照射下顯示核酸條帶，用橙紅色濾光片照相，暴光15－20秒。
倒轉電場凝膠電泳可採用普通的瓊脂糖凝膠電泳槽，將交變電場電泳儀的左右兩對電源輸出正向和反向接在電泳槽正負極，使正向電泳時間大於反向電泳時間。其餘操作與一般電泳相同。在電泳開始前，要先接通電泳儀電源，打開電源開關，調節所需的時間，然後打開工作開關，待A組和B組顯示都有數字時，調節輸出選擇旋鈕至所需電流和電壓數值，電泳完畢後，須將輸出選擇旋鈕調回0位，關閉電源開關。
註：電源開關開啟時必須把電壓電流旋至0。
