《樟樹花粉蛋白質的分離純化及其致敏動物模型的建立》是依託上海交通大學，由閆曉梅擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：樟樹花粉蛋白質的分離純化及其致敏動物模型的建立
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：閆曉梅
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
植物花粉所含的特異性蛋白質成為人體發生過敏性鼻炎和哮喘等疾病的重要變應原。大量的文獻報導了國內外多種氣傳致敏花粉的種類、分布、變應原、致敏性及其治療等研究結果。目前，國內外已對梧桐、豚草、葎草、梯牧草、蒿屬、柏樹等10餘種花粉的變應原進行了分離純化和鑑定。然而，關於樟樹花粉的蛋白質譜分析、變應原蛋白質鑑定及其致敏機制的研究卻鮮有報導。.本項目旨在對樟樹花粉的蛋白質譜進行分析鑑定；並對其變應原進行分離純化、性質鑑定；用克隆重組的變應原建立致敏動物模型，以便對樟樹花粉的致敏機制進行深入探索。期望通過調查研究，鑑定出樟樹花粉的重要變應原，初步闡明樟樹花粉的致敏機制，為今後實施樟樹花粉特異性致敏疾病的檢測和相應的特異性免疫治療打下堅實的基礎。
結題摘要
本項目圍繞和嘗試解決樟樹花粉是否是上海地區的花粉過敏原以及尋找相應的變應原展開，嚴格按照課題計畫任務書的預定目標執行和既定方案實施。本項目執行一切進展順利，完成了任務書中的全部內容，主要包括：首先通過反覆探索獲得了一整套成熟的樟樹花粉蛋白質提取和鑑定流程；通過大量血清雜交初步獲得了兩個花粉變應原；成功建立了樟樹花粉致變應性鼻炎小鼠模型；通過生物信息學分析獲得了2個已知序列的變應原。已經完成了預期3個目標，解決了3個關鍵科學問題，完成了10個主要研究內容。目前與本項目相關的已經發表/投稿期刊和會議論文4篇，保證了本項目的順利結題。主要研究成果如下： 1.建立了一套成熟的樟樹花粉蛋白質提取和鑑定流程。樟樹花朵小而密、花期短、散粉快，需要在短時間內大量收集和純化。且植物花粉的蛋白質抽提一直是科研工作者的難點。我們對樟樹花粉的採集、純化、破壁、蛋白質提取、濃縮鑑定等進行反覆探索和最佳化，建立了一套抽提和鑑定流程。 2.在樟樹花粉中檢測到兩個變應原。將上海市西南部春季和秋季氣傳花粉的調查數據與西南部醫院呼吸科中過敏性鼻炎和哮喘病人比例進行曲線擬合分析，提示在上海市西南部,樟樹花粉在空氣中的大量傳播與此時過敏性疾病患者如鼻炎和哮喘的增多相關。通過花粉蛋白質與過敏性鼻炎和哮喘患者血清的點雜交進行篩選，在182份血清中共檢測到6份樣品出現陽性斑點反應，比例約為3.3%。進一步的Western Blot檢測表明引起過敏的變應原可能是花粉中兩個約58KD和62KD的蛋白質。 3.樟樹花粉致過敏性鼻炎小鼠模型的建立。提取樟樹花粉蛋白質，對小鼠進行腹腔和皮下多點注射免疫，並滴鼻激發。致敏組小鼠出現了頻繁抓鼻、打噴嚏等過敏性鼻炎症狀（評分＞5分）；鼻分泌物塗片中嗜酸性粒細胞明顯增多，鼻部組織切片顯示鼻腔黏膜層明顯充血水腫，白細胞浸潤；血清中IgE含量明顯上升（P＜0.05）。成功建立了樟樹花粉致過敏性鼻炎小鼠動物模型，樟樹花粉會引起部分小鼠個體發生過敏性鼻炎症狀。 4.套用生物信息學方法預測樟樹花粉的變應原，獲得了包括profilin-like protein和Fe-SOD為主的變應原。對比分析這2個基因在植物花粉進化過程中的產生、結構、表達和變異信息，並在進化上和其它物種比較，解釋其作為樟樹花粉過敏源的可能性，為進一步免疫學分析提供依據。
