核苷酸還原酶RRM2在小鼠胚胎著床過程中的調節與功能

《核苷酸還原酶RRM2在小鼠胚胎著床過程中的調節與功能》是依託汕頭大學，由楊增明擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：核苷酸還原酶RRM2在小鼠胚胎著床過程中的調節與功能
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：楊增明
• 依託單位：汕頭大學

項目摘要

核苷酸還原酶（RR）為DNA合成過程中起關鍵作用的一個限速酶，其全酶活性主要受小亞基RRM2水平的調節，其中RRM2在很多惡性腫瘤中高表達。在我們前期的基因晶片分析中發現，與非著床點相比，RRM2的表達在小鼠子宮的胚胎著床點顯著上調，有關RRM2在胚胎著床過程中的調節與功能等尚未見報導。本研究將利用多種體內動物模型和體外模型，對RRM2在小鼠胚胎著床期子宮中的表達、調節及功能進行詳細分析，並利用免疫共沉澱、啟動子分析、凝膠遷移滯後實驗、基因過表達、RNA干涉等手段，研究RRM2與其他胚胎著床相關基因的調節關係，所得結果將對了解胚胎著床的機理等具有重要意義。

結題摘要

核糖核酸還原酶RNR由大亞基Rrm1和小亞基Rrm2或Rrm2b構成的活性酶，為DNA複製提供足夠的dNTPs。原位雜交和Western blot方法在早期妊娠著床前子宮以及假孕子宮中都檢測不到Rrm1和Rrm2的mRNA和蛋白信號。胚胎著床後，Rrm1和Rrm2在著床位點的基質細胞中表達，並隨著蛻膜化進行在整個蛻膜區表達。Rrm1和Rrm2在延遲著床中不表達，著床激活後開始在著床位點的基質細胞中表達，表明Rrm1和Rrm2的表達受活性胚胎的誘導。Rrm1和Rrm2在人工誘導蛻膜化子宮中也大量表達。 給妊娠第4天小鼠注射Rrm2活性抑制劑羥基脲（HU）明顯減輕著床位點子宮的重量。給人工誘導蛻膜化的小鼠腹腔注射HU能抑制蛻膜化的形成，並顯著抑制蛻膜標誌分子Dtprp的表達。這些結果表明，由Rrm2和Rrm1形成的RNR在胚胎著床和蛻膜化過程中的細胞增殖和多核化中發揮重要作用。 在激素處理模型中，孕酮（P4）能上調Chk1和Rrm2的表達，而孕酮受體抑制劑RU486能阻斷P4的誘導作用。Chk1的抑制劑UCN-01能阻斷基質細胞中P4對Rrm2的調節作用。體外培養的基質細胞中，拓撲異構酶抑制劑CPT、HU和UV照射均能誘導Chk1、E2F1和Rrm2的表達。Atr/Atm的抑制劑caffeine和UCN-01能抑制CPT、HU和UV對E2F1和Rrm2的誘導作用。E2F1干涉後也能抑制CPT對Rrm2的調節。這些結果表明，CPT、HU和UV通過Atr/Atm-Chk1-E2F1信號通路調節基質細胞中Rrm2的表達。Rrm2還能抑制NF-kB的活性，從而下調Mmp9的表達和酶活性，防止胚胎過度侵入。 我們的結果表明，Rrm2在胚胎著床和蛻膜化過程中發揮重要作用。在活性胚泡的聯合刺激下，P4可能通過Bmp2和Chk1協同誘導基質細胞大量表達Rrm2，促進細胞增殖和多核化，維持妊娠的正常進行。