核糖體蛋白RPL7A對骨肉瘤細胞的生長的影響及機制研究

《核糖體蛋白RPL7A對骨肉瘤細胞的生長的影響及機制研究》是依託上海交通大學，由鄭水兒擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：核糖體蛋白RPL7A對骨肉瘤細胞的生長的影響及機制研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：鄭水兒
• 依託單位：上海交通大學

項目摘要

在我們先前的研究中，從mRNA及蛋白質水平檢測發現核糖體蛋白基因L7A（RPL7A）在骨肉瘤患者較正常、良性骨腫瘤患者的表達顯著降低；臨床資料分析顯示骨肉瘤患者該基因高表達者總生存期顯著高於低表達者。該研究結果我們新近發表於J Cancer Res Clin Oncol雜誌。在隨後的研究中，我們還發現RPL7A的表達在化療藥物不敏感的骨肉瘤細胞系MG-63/DXR1000中較親本MG-63降低。本課題擬將RPL7A過表達載體轉入骨肉瘤該基因低表達細胞系，將RPL7A siRNA表達載體轉入該基因高表達細胞系,獲得穩定轉染細胞系。對其進行細胞生長行為、細胞周期、凋亡、化療藥物敏感性等特性方面的檢測，結合臨床樣本的驗證及患者隨訪信息統計分析，初步揭示RPL7A在骨肉瘤細胞生長中的作用及可能機制，為骨肉瘤的治療、預後判斷提供理論補充及可靠實驗依據。

結題摘要

核糖體蛋白RPL7A對骨肉瘤細胞生長影響一課題，我們通過過表達及干擾載體構建（具體參見附屬檔案中2011年度進展報告），體外研究表明其對細胞增殖、凋亡、細胞周期均無顯著影響。我們考慮，由於該基因篩選中樣本量不夠大導致結果偏倚，故放棄該基因在骨肉瘤中的研究，調整為如下研究：UCHL1（Ubiquitin C-Terminal Hydrolase L1）基因對骨肉瘤細胞生長的影響及機制研究。該基因前期工作建立在對40例骨肉瘤標本及5種骨肉瘤細胞系基因表達譜分析的基礎上，並經mRNA水平及蛋白水平驗證，表明其表達與患者遠處轉移、生存有關。UCHL1具有水解泛素、泛素連線酶和單泛素穩定劑的多種功能。UCHL1在正常神經元及神經內分泌細胞廣泛表達。近來研究發現其還在多種腫瘤組織如肺癌、乳腺癌、腸癌、前列腺癌、淋巴瘤、惡性黑色素瘤等中異常表達，功能表現為癌基因或抑癌基因，迄今對其功能及其與腫瘤發生髮展的關係仍知之甚少。其在骨肉瘤發生髮展中作用尚未報導。我們提出假說：UCHL1可能在骨肉瘤的發生髮展中起重要作用。首先通過免疫組化方法檢測10例正常骨組織和70例骨肉瘤組織中UCHL1蛋白的表達，進行臨床病理、生存分析及Cox多因素分析。發現10例正常骨組織不表達UCHL1，70例骨肉瘤組織中有35例UCHL1高表達，而且其高表達與腫瘤最大徑和肺轉移呈正相關，高表達組的中位生存時間為21個月，遠低於陰性和低表達組的36個月(P＜0.05)。Cox分析表明，UCHL1基因的表達水平是骨肉瘤患者的獨立預後因素。體外，CCK-8法檢測發現LDN-57444顯著抑制細胞增殖。構建UCHL1-shRNA慢病毒干擾載體和UCHL1-pWPXL慢病毒過表達載體，分別感染骨肉瘤細胞MG63（高表達UCHL1）和Saos-2（相對低表達UCHL1）後，均發現UCHL1基因促進骨肉瘤細胞增殖、克隆形成、裸鼠體內成瘤，促進G1/S細胞周期進程，減少凋亡，增強細胞遷移能力。Western blot檢測表明，其機制與調節Akt、ERK信號通路，進一步影響其下游細胞周期相關蛋白的表達（MYC, Cyclin D1, Cyclin E1, CDK2, CDK6, P27）有關；細胞凋亡與BCL2蛋白有關。本研究初步闡明了UCHL1在骨肉瘤中發生髮展中的臨床意義及分子機制，為臨床治療拓展新的分子靶點、預後判斷奠定基礎。