《核仁蛋白PAK1IP1調節核糖體生物合成的功能及機理研究》是依託華東師範大學，由李大力擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：核仁蛋白PAK1IP1調節核糖體生物合成的功能及機理研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：李大力
- 依託單位：華東師範大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
PAK1IP1是一個進化上非常保守的核仁蛋白，含有多個WD40結構域。敲除酵母中的同源基因導致細胞死亡，而哺乳動物中的PAK1IP1基因能修復致死表型。申請者已發表的論文發現PAK1IP1與MDM2結合抑制p53的泛素化降解，影響細胞G1/S期轉換而抑制細胞增殖。干擾內源PAK1IP1的表達促使游離核糖體蛋白的釋放而穩定p53蛋白，出現與過表達類似的表型。為進一步深入研究，本申請將結合細胞、動物模型和分子機理的研究，闡明其生物學功能。擬利用northern雜交和氚標記rRNA等技術，明確PAK1IP1在核糖體加工過程中的功能；擬利用串聯親和純化技術發現其相互作用蛋白，根據發現的蛋白複合物，進一步闡明其相關功能和作用機制；利用ES細胞分化模型，研究其調控幹細胞生長和分化的功能及機理；利用基因敲除小鼠模型研究其在胚胎髮育和腫瘤發生髮展中的功能。
結題摘要
PAK1IP1是核仁蛋白，含有多個WD40結構域。敲除酵母中的同源基因導致細胞死亡，而哺乳動物中的PAK1IP1基因能修復致死表型，說明該基因是一個進化上非常保守具有重要功能的蛋白。我們的前期研究表明PAK1IP1參與核糖體應激過程，調節P53的穩定性。本課題發現PAK1IP1在核糖體RNA加工中調節32S向28S rRNA的加工進程而調控60S核糖體大亞基的成熟。通過串聯親和純化技術鑑定了多個潛在與PAK1IP1相互作用的蛋白，通過驗證發現Nucleostemin與PAK1IP1相互作用。進一步的研究發現PAK1IP1可能通過影響Nucleostemin在核仁中的滯留而調控核糖體RNA的加工過程。通過TALEN基因編輯技術構建了PAK1IP1基因敲除小鼠模型，發現基因缺失小鼠在著床前胚胎致死。除了TALEN基因編輯技術，還開展了基於CRISPR/Cas技術體系的小鼠和大鼠胚胎基因操作研究。利用CRISPR技術，通過注射兩個sgRNA構建了基因組DNA片段的刪除的小鼠品系，並在大鼠胚胎中通過注射針對不同基因的sgRNA，得到多基因同時突變的大鼠品系，成為世界上第一個報導利用CRISPR/Cas9技術構建基因修飾大鼠的技術團隊。
