《果蠅Notch糖蛋白O-糖組的質譜分析研究》是依託西北大學，由王仲孚擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：果蠅Notch糖蛋白O-糖組的質譜分析研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：王仲孚
- 依託單位：西北大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
Notch信號通路調控細胞的分化及凋亡等發育過程，其受體蛋白是Notch蛋白，存在N-和O-糖基化修飾，其中O-糖基化對Notch信號轉導是必需的，O-糖鏈直接介導了Notch蛋白與其配體之間的相互結合。現有的研究主要集中於功能方面，對Notch蛋白O-糖組結構研究很少，主要是通過糖基轉移酶水平等間接的推測分析得到的，缺乏結構生物學的直接的和更有力的證據，影響了對Notch蛋白與其配體蛋白相互作用的分子機制的研究。本項目利用本實驗室已經建立的O-糖鏈非還原性解離和定量方法，以質譜為手段，全面解析果蠅Notch蛋白O-糖組的精細結構信息，包括O-糖組的種類、分子量分布、連線方式、序列等，系統分析不同發育階段的表達量及糖型差異。本項目研究將進一步驗證、補充和完善現有的對果蠅Notch蛋白O-糖組結構的推測，對進一步揭示Notch信號通路的分子機制有重要意義，也將為藥物新靶標發現提供科學依據。
結題摘要
Notch信號通路調控細胞分化和凋亡等發育過程，Notch蛋白是其中的關鍵受體分子。研究表明，Notch蛋白的O-糖基化對信號轉導過程是必需的，O-糖鏈直接介導了Notch蛋白與其配體蛋白之間的相互結合，因此Notch蛋白O-糖鏈結構研究對闡明Notch蛋白與其配體蛋白相互作用的分子機制有重要意義。本項目完成了果蠅及其細胞的培養和收集、Notch糖蛋白的表達和分離製備、利用本實驗室發展的O-糖鏈解離及同時標記PMP新技術對Notch糖蛋白O-糖鏈的解離、利用質譜對Notch糖蛋白O-糖組表達圖譜的獲取以及利用LC-MS/MS技術對Notch糖蛋白O-糖鏈同分異構體精細結構的解析，同時改進了O-糖鏈解離及同時標記PMP的方法，消除了peeling副反應的影響，建立了基於d0/d5-PMP穩定同位素試劑標記的定性定量分析O-糖鏈的策略，並對不同發育階段果蠅糖蛋白O-糖組進行了定性定量比較研究。在本項目的支持下，在 Journal of Proteome Research、Journal of Proteomics、Journal of Agricultural and Food Chemistry、Food Chemistry、高等學校化學學報等期刊發表13篇SCI論文，並發表15篇會議論文，完成3篇博士論文和10篇碩士論文。
