杯蝶法是用於抗生素的測定的瓊脂擴散生物檢定法。按操作方式不同，瓊脂擴散法生物檢定可以分為三種:①杯碟法，②濾紙片法，⑧管碟法。其中以管碟法和濾紙片法套用較廣。
基本介紹
- 中文名：杯蝶法
- 外文名：cylinder plate method
- 用途：用於抗生素的測定
- 檢出限：4IU/ml
- 套用食品：乳與乳製品
- 特點：定性的準確方法
原理,方法,小結,
原理
杯碟法
該方法採用對青黴素類藥物絕對敏感的標準菌株，利用舒巴坦特異性抑制β-內醯胺酶的活性，並加入青黴素作為對照，通過比對加入β-內醯胺酶抑制劑與未加入抑制劑的樣品所產生的抑菌圈的大小來間接測定樣品是否含有β-內醯胺酶藥物
方法
- 試驗菌種：
藤黃微球菌(Micro—COCCUS luteus)CMCC(B)2800l，傳代次數不得超過14次； - 磷酸鹽緩衝溶液(pH 6.0)：
無水磷酸二氫鉀8.0 g，無水磷酸氫二鉀2.0 g，蒸餾水加至1000 ml； - 生理鹽水（8.5g/L）：
氯化鈉8.5g，蒸餾水1000 ml，121℃高壓滅菌15min； - 青黴素標準溶液：
準確稱取適量青黴素標準物質，用磷酸鹽緩衝溶液溶解並定容為0.1mg/ml。當天配製當天使用； - β一內醯胺酶標準溶液：
- 準確稱取β一內醯胺酶標準物質，用磷酸鹽緩衝溶液溶解並定容為16000 U/ml的標準物質。當天配製當天使用；
- 舒巴坦標準溶液：
準確稱取適量舒巴坦標準物質，用磷酸鹽緩衝溶液溶解並定容為1mg/ml的標準溶液，分裝後於一20℃保存備用，不可反覆凍融使用； - 營養瓊脂培養基：
按盒上要求配製，攪拌均勻，分裝試管每管5～8ml，120。C高壓滅菌15 rain，滅菌後擺放斜面； - 抗生素檢測培養基Ⅱ：
購買pH值為6.6的培養基，按盒上要求配製，攪拌均勻，120。C高壓滅菌15 min。
小結
β-內醯胺酶系我國禁用的食品添加劑之一，該酶的使用掩蓋了牛奶中實際含有的抗生素，β-內醯胺酶能夠使青黴素內醯胺結構破壞而失去活性，導致青黴素、頭孢菌素等抗生素類藥物耐藥性增高，從而大大降低了人們抵抗傳染病的能力，給消費者的身體健康帶來危害。
在目前幾種不成熟的檢測方法中，生物杯碟法是個較好的選擇。杯碟法適用於乳與乳製品中舒巴坦敏感β-內醯胺酶類藥物的檢驗。
