《新基因hBiot2在人子宮頸癌中的生物學功能及作用機理》是依託四川大學，由沈揚眉擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：新基因hBiot2在人子宮頸癌中的生物學功能及作用機理
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：沈揚眉
- 依託單位：四川大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
hBiot2是我們通過血清學篩選發現和克隆的新基因，前期研究結果提示hBiot2可能是一個與腫瘤發生髮展相關的癌基因。hBiot2 mRNA在子宮內膜癌和宮頸癌中的表達較其對應的正常內膜和宮頸組織高、分化低的內膜癌及有淋巴結轉移的宮頸癌較分化高的內膜癌和無淋巴結轉移的宮頸癌表達高；hBiot2的表達還與大腸癌患者的預後有關。本課題的目的是在前期從RNA水平發現hBiot2表達與宮頸癌關係的基礎上，擬進一步從蛋白水平研究hBiot2在宮頸癌中的生物學功能，製備hBiot2抗體解析其蛋白的相互作用蛋白，分析宮頸癌細胞中過表達或RNA干擾hBiot2表達後與其相互作用蛋白的變化來探討其在腫瘤細胞生長、遷移等生物學功能的作用機制。免疫組化檢測hBiot2蛋白在不同組織學類型的宮頸癌中的表達水平，並統計分析與分期、患者預後等。本研究將增強理解hBiot2新基因的生物學功能及其在宮頸癌發生髮展中作用。
結題摘要
本課題首先進行了hBiot2基因的全長克隆，將hBiot2基因全長克隆到pET30a-GST質粒上，片段總大小約5kb，經測序證明克隆成功；然後將重組質粒轉入大腸桿菌BL21中，進行蛋白的誘導表達及純化；緊接著將獲得的重組蛋白免疫BALB/C雌性小鼠，獲得多克隆抗體，選效價最高的小鼠進行融合實驗以篩選單克隆抗體；經測定單克隆抗體的大小為53kd，濃度約4.42mg/ml，純度大於90%。檢測hBiot2單克隆抗體在細胞水平及組織水平的表達情況，結果顯示在宮頸癌細胞株Hela及宮頸鱗癌組織中，hBiot2表達均定位於細胞質和細胞膜中；同時選取了50例人子宮頸鱗狀細胞癌病例及其對應的正常宮頸組織，進行免疫組化實驗，觀察hBiot2單克隆抗體在不同臨床分期的宮頸鱗癌組織中的表達差異，實驗結果提示，hBiot2單克隆抗體高表達於人子宮頸鱗狀細胞癌，而在正常宮頸鱗狀上皮組織中低表達或者不表達，正常宮頸內膜腺體也不表達。這些實驗結果均提示，hBiot2基因在蛋白水平也是一個與腫瘤發生相關的基因。
