《新基因CIAPIN1選擇性剪接體在胃癌發生髮展中的功能研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由李曉華擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：新基因CIAPIN1選擇性剪接體在胃癌發生髮展中的功能研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：李曉華
- 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
CIAPIN1是我科2004年發現的一個新的人類耐藥相關基因，我們前期發現CIAPIN1與腫瘤發生、多藥耐藥和應激反應相關。近期實驗發現CIAPIN1存在兩個選擇性剪接體，但在胃癌發生髮展中的作用尚不清楚。本項目將在我們前期工作基礎上，利用RT-PCT檢測CIAPIN1剪接體在胃癌組織和細胞中的表達，EGFP融合蛋白表達檢測亞細胞定位，分析不同剪接體表達水平與胃癌臨床病理資料之間的相關性，採用真核表達基因轉染研究CIAPIN1剪接體對胃癌惡性生物學表型的影響，藉助TAP方法和飛行時間質譜研究CIAPIN1不同剪接體的相互作用分子，藉助基因晶片和抗體晶片尋找CIAPIN1不同剪接體的下游調控分子；對所獲得的高通量信息進行分析和歸類，尋找CIAPIN1不同剪接體參與胃癌調控的信號通路，從而較充分的揭示CIAPIN1及其不同剪接體介導胃癌發生髮展的機制，為胃癌的防治打下更好的基礎。
結題摘要
CIAPIN1是我科於2000年報導的一個新的人類胃癌耐藥相關基因，也是RAS信號通路下細胞因子誘導凋亡的調控分子之一。目前國內外關於CIAPIN1調控腫瘤發生髮展的文獻結果存在巨大差異：部分報導CIAPIN1抑制腫瘤發生髮展，部分報導CIAPIN1促進腫瘤發生髮展。我們近期研究結果顯示：CIAPIN1存在兩個選擇性剪接體，但其功能尚不清楚、其與胃癌的關係更未見報導。本項目正是在我們上述工作基礎上，首先利用PCR方法檢測 CIAPIN1 剪接體在胃癌組織的表達分布，及其表達水平與胃癌臨床病理資料之間的相關性，我們發現CIAPIN1α在胃癌組織中高表達，並與胃癌增殖、TNM分期、轉移正相關；而CIAPIN1β在胃癌組織中低表達，並與胃癌增殖、TNM分期、轉移負相關和細胞中。體外實驗結果顯示，CIAPIN1α可促進胃癌細胞增殖、侵襲、轉移；藥敏實驗以及ADR蓄積與瀦留實驗同樣顯示，CIAPIN1α促進胃癌細胞耐藥的機制之一是加速藥物的泵出，減少藥物在細胞內的蓄積與瀦留；而CIAPIN1β抑制胃癌細胞耐藥的機制之一是降低藥物的泵出，增加藥物在細胞內的蓄積與瀦留。侵襲、轉移結果顯示，CIAPIN1α促進胃癌低轉移潛能細胞MKN-28侵襲、轉移，而CIAPIN1β可抑制高轉移潛能細胞MKN-28M侵襲、轉移。進而採用免疫螢光染色和PEGFP-C2亞細胞定位載體轉染的方法，我們發現CIAPIN1α主要分布在細胞漿，而CIAPIN1β主要分布在細胞核，兩者分布的不同也許與其功能密切相關，但尚有待於進一步研究。在完成上述表型分析的同時，我們採用基因晶片尋找 CIAPIN1 剪接體下游的調控信號通路，篩選獲得了部分轉移、增殖相關的分子，但由於缺乏CIAPIN1剪接體的特異性抗體，以及在亞細胞定位方面實驗進展不順利，所以，機制方面尚未進行深入的研究，但通過我們上述的研究，基本可以說明，目前國內外關於CIAPIN1調控腫瘤發生髮展的文獻結果存在巨大差異：如部分報導CIAPIN1抑制腫瘤發生髮展，部分報導CIAPIN1促進腫瘤發生髮展，該差異結果很大可能是由於CIAPIN1剪接體的存在而導致一開始CIAPIN1基因克隆過程中出現了錯誤，進而導致早先一些研究結果的巨大差異。
