《新型RBP131脂質體套用於mRNA體內外給藥的性能與機理研究》是依託北京大學，由黃淵余擔任負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：新型RBP131脂質體套用於mRNA體內外給藥的性能與機理研究
- 項目負責人：黃淵余
- 依託單位：北京大學
- 項目類別：青年科學基金項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
廣義的基因治療包括基於質粒DNA、RNA干擾、信使RNA的三代技術，基於mRNA的基因治療近年來正成為新的研究熱點，但限制其廣泛套用與開發的關鍵技術瓶頸在於缺乏安全、高效的體內給藥系統。前期研究中，申請人獲得了全球尚無報導的、具有突出肝靶向給藥能力的新型RBP131脂質體載體。本項目擬結合RBP131的新穎性與mRNA給藥的緊迫性，研究RBP131套用於mRNA體內外輸送的效果及其內在機理。項目通過體外轉錄獲得穩定化的mRNA，並製備RBP131/mRNA納米體系，表征其理化性質，研究其細胞轉染的效果與機理，考察其體內外安全性；並在小鼠體內探索RBP131介導mRNA肝靶向投遞與基因表達的能力及其內在機制；最後在低血糖小鼠模型上遞送胰高血糖素mRNA，研究其改善低血糖症狀的治療效果，以期為長期低血糖的糖尿病人的治療提供一種新方案，更為廣泛的肝靶向mRNA給藥與套用提供高效、安全的新工具。
結題摘要
基於mRNA的基因治療近年來正成為新的研究熱點，但mRNA不夠穩定、以及存在如何實現安全高效的體內遞送的關鍵技術難題。本項目中，承擔團隊首先建立了mRNA的體外轉錄技術平台，構建了三種（紅色螢光蛋白RFP、螢火蟲螢光素酶Luciferase、促紅細胞生長素EPO）的PCR質粒，且就其中的EPO表達序列進行了密碼子最佳化，基於該系列質粒，研究者利用抗倒轉帽類似物（anti-reverse-cap analogue, ARCA）進行體外轉錄得到mRNA，在HepG2、Hela等細胞上研究了RFP、Luciferase、EPO的表達效果，同時在動物水平，通過利用研究者前期獲得的優秀核酸遞送脂質體RBP131包裹Luciferase或EPO mRNA，建立了脂質體包裹mRNA的製備工藝，闡明了製劑理化性質，並成功的在小鼠體內實現了靶蛋白的表達，其中密碼子最佳化的EPO mRNA表達豐度較未最佳化的mRNA顯著提升；最後，研究者還考察了RBP131負載核酸在小鼠體內的初步安全性，證明了其理想的生物相容性。 整體上，該項目的實施，證實了密碼子最佳化、ARCA體外轉錄對mRNA穩定性與表達效果的增強作用，闡明了RBP131對mRNA的有效包裹及體內遞送效力，為基於mRNA的基因治療、疫苗研究奠定了良好的理論與技術基礎，為貧血病人的治療提供了潛在的新療法、新方案。
