《新型海洋生物纖溶酶溶栓活性分子機理研究》是依託中國海洋大學，由劉偉治擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：新型海洋生物纖溶酶溶栓活性分子機理研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：劉偉治
- 依託單位：中國海洋大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
老齡化問題的加劇和臨床溶栓藥物副作用大都迫切需要開發新型抗血栓藥物。經過多年研究，我們從單環刺螠中首次成功分離提取了一組纖溶酶（UFE-I，II，II，IV），研究發現它們具有抗凝和纖溶活性，並成功獲得了兩個關鍵組分（II，III）的cDNA。雖然序列比對顯示它們都屬於胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白水解酶，但研究發現它們在酶學活性和底物特異性上有很大差異。UFE-II溶栓活性好於UFE-III和蚓激酶。推測底物結合口袋蛋白構象不同是導致它們溶栓活性和底物結合特異性差異的結構基礎。為深入研究UFE-II，-III藥學活性差異的分子基礎，計畫首先利用重組表達技術在體外表達純化重組UFE-II，III，然後利用結構生物學技術，結合定點突變從分子水平上闡明UFE-II，-III的溶栓機理和底物結合特異性。本項目的實施會加深對UFE溶栓活性分子機理的認識，為基於結構的新型溶栓藥物開發提供基礎。
結題摘要
隨著人口老齡化及人們生活方式的改變，心腦血管疾病已經成為影響人民生活水平提高的主要原因。溶栓酶是心腦血管疾病預防與治療的重要途徑。當前的溶栓藥物依然存在著成本高，半衰期短的問題。因此，新型天然溶栓劑是當前溶栓藥物開發的重要方向。同時，開發海洋資源也是當前我們國家重要的戰略目標。為此，在該項目基金的支持下，圍繞著溶栓與酶這一主題，申請人主要開展了三方面的工作：1.完成了新型海洋生物溶栓酶的體外重組表達，活性及構效關係研究。建立了酶的體外重組表達體系，通過包涵體復性技術獲得了有活性的溶栓酶，並利用多種技術研究了該重組酶的活性，驗證了結構與活性的關係。2.完成了一種新型微生物來源的溶栓酶純化，活性及晶體結構研究。獲得了高純度的微生物來源的類納豆激酶。在進行活性研究的基礎上，利用懸滴法獲得了該酶的晶體。在上海同步輻射光源衍射後獲得解析度為1.8 Å的衍射數據，經過分子置換後解析了其晶體結構，相關結構數據已經提交到蛋白質資料庫（PDB：5GL8）。該研究闡明此酶的作用機制，為其後續套用研究奠定了基礎。3. 在項目支持下，申請人還開展了海洋多糖水解酶的發現研究。獲得了多種新型的多糖水解酶。 在該項目的支持下，申請人完成了對兩種重要的天然溶栓酶及海洋多糖水解酶的研究。成功解析了其中一個酶的三維結構。由於天然溶栓酶藥物開發的迫切性和重要性，在該研究基礎上，山東睿鷹集團就溶栓酶在海洋藥物領域的開發研究與申請人課題組簽訂了五年（2014-2018）的聯合研究開發協定，項目組獲得了集團150萬元產學研項目資助，進行該酶的深入研究開發。迄今部分研究成果已發表研究論文2篇，另外1篇正在投稿中，還有1篇在撰寫中，後續相關的研究正在開展中。
