新型小分子化合物SKLB226抗黑色素瘤的作用機制研究

《新型小分子化合物SKLB226抗黑色素瘤的作用機制研究》是依託四川大學，由陳新擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：新型小分子化合物SKLB226抗黑色素瘤的作用機制研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：陳新
• 依託單位：四川大學

項目摘要

黑色素瘤是一種高度惡性的皮膚腫瘤，其致死率居所有腫瘤之首。近年來，靶向BRAF的小分子藥物為黑色素瘤治療帶來了希望，但臨床治療中腫瘤常對這類靶向藥物產生抵抗，深入研究其耐藥機制並開發新靶點藥物是目前亟待解決的問題。近來研究提示，MITF有望成為黑色素瘤治療的新靶點，但是目前能抑制MITF表達的藥物較少，因此急需開發高效特異的化合物靶向MITF治療黑色素瘤。而我們前期合成的一個小分子化合物SKLB226，能明顯抑制黑色素瘤細胞的生長浸潤，進一步研究發現它能有效抑制MITF表達，由此我們推測其抗黑色素瘤作用與MITF相關信號通路有關。在此基礎上，本課題擬採用差異蛋白組學技術、生物信息學方法研究SKLB226調控MITF信號通路的抗腫瘤分子機制，同時檢測SKLB226與BRAF抑制劑聯合套用治療黑色素瘤的協同增效作用。本研究為將來黑色素瘤的靶向治療提供了實驗基礎和新的思路。

結題摘要

黑色素瘤是由黑色素細胞惡變而來的高度惡性皮膚腫瘤，以其疾病進展快、耐藥性強而惡名遠揚。約一半以上的黑色素瘤患者有BRAF基因的突變，現已有兩個靶向BRAF的小分子藥物威羅菲尼和達拉菲尼，它們能夠顯著延長黑色素瘤患者的無進展生存期。雖然治療初期腫瘤會縮小，但大部分患者在一年內會復發，甚至發展為耐藥的黑色素瘤。因此迫切需要研究黑色素瘤耐藥的分子機制，開發相應靶點藥物，聯合治療以克服耐藥。目前研究發現的BRAF耐藥機制有兩個方面，一方面是MEK依賴的耐藥，另一方面則為不依賴MEK的耐藥。最近的研究提示，MITF參與了非MEK導致的BRAF耐藥的發生，MITF在黑色素瘤維持乾性和分化過程中發揮重要的調控作用。因此，MITF有望成為黑色素瘤治療的新靶點。 目前能抑制MITF表達的藥物較少，主要為廣譜的組蛋白去乙醯化酶抑制劑。這些藥物特異性、針對性較差。因此急需開發高效特異的化合物靶向MITF治療黑色素瘤。本課題通過斑馬魚胚胎黑色素生成模型篩選到一個小分子化合物SKLB226，它能有效抑制斑馬魚黑色素生成，而後我們證實SKLB226可以抑制黑色素瘤細胞B16的色素生成。通過一系列實驗發現它可以抑制MITF及其下游的TYR、TYRP1及DCT的表達並呈劑量依賴性。敲除MITF以後，可以致死。由此推斷SKLB226可能通過調控MITF相關信號通路而發揮抗黑色素瘤作用。經western blot實驗檢測發現SKLB226抑制了MITF的表達。SKLB226也抑制了MITF下游的TYR、TYRP1、DCT的表達。而後我們用流式細胞術檢測發現，SKLB226在15μM時引起了細胞發生凋亡及死亡。我們又用劃痕和transwell實驗檢測發現30μM時顯著抑制了B16細胞的侵襲及遷移。而後我們又用western blot方法檢測了轉移有關的蛋白表達情況，發現SKLB226可以促進E-cadherin蛋白的表達，並抑制Vimentin蛋白的表達。最後，我們在小鼠體內檢驗了SKLB226對B16細胞肺轉移情況的作用，發現在150mg/kg時可以有效抑制B16細胞的肺轉移情況。綜上所述，SKLB226抑制黑色素生成，其作用靶標為MITF，同時SKLB226可以抑制黑色素瘤細胞的增殖、侵襲及遷移，並促進其發生凋亡。