《新型多肽及修飾體抗感染性HUS活性及其作用機制研究》是依託中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院，由王慧擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：新型多肽及修飾體抗感染性HUS活性及其作用機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：王慧
- 依託單位：中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
感染性溶血性尿毒綜合徵(Haemolytic uraemic syndrome，HUS)是兒童急性腎衰竭的最主要原因，可導致5－10％病例死亡。志賀樣毒素（Slt）是病原細菌重症感染誘發HUS的關鍵致病原，直接針對Slt的藥物設計已被證實有效。本研究擬以前期生物文庫篩選獲得的抗Slt活性肽TF12，WA12（專利申請號CN200710064228.7）為基礎，進行多肽結構修飾，分別通過線性肽化學基團修飾、多肽支鏈化及PEG化等，提高穩定性、結合效價和生理長效性；利用Slt的生物毒模型和小鼠感染性HUS模型，評價新型活性肽抗感染性HUS的效果，遴選肽抑制劑的優勢結構；套用大鼠觀察新型多肽清除體內病原毒素(Slt)的效果，並對多肽進行初步毒性研究。同時，運用毒素細胞互作模型和胞內轉運模型，基於突變技術、流式細胞術、雷射共聚焦、表面等離子共振技術等，在分子和細胞水平探討新型活性肽的作用機制。
結題摘要
感染性溶血性尿毒綜合徵(Haemolytic uraemic syndrome，HUS)是兒童急性腎衰竭的最主要原因，可導致5－10％病例死亡。志賀樣毒素（Slt）是病原細菌重症感染誘發HUS的關鍵致病原，直接針對Slt的藥物設計已被證實有效。本研究以前期生物文庫篩選獲得的抗Slt活性肽為基礎，進行多肽結構修飾，獲得新型多肽NF12 (又名P1)。利用BIAcore SPR技術對多肽和重組Stx2 蛋白的特異結合活性進行動態分析，P1 與Stx2 結合能力高於其它的多肽，測得多肽P1 與Stx2 結合的親和力常數 KD：1.25e-6。MTT法篩選多肽P1抑制Stx2 對HeLa細胞毒性作用，結果發現仍然是P1對Stx2 的細胞毒作用的抑制率高於其它的多肽。 P1：IC50為180 μM，相同濃度P1（300 μM）對Stx2（5×CD50）細胞毒作用的抑制率達82%。進一步，利用動物水平評價多肽的抗志賀毒素活性。（1）在BALB/c小鼠攻毒致死模型上的評價，採用先腹腔給予多肽，20min後10 LD50腹腔攻毒實驗。多肽的劑量為22mg/kg時，保護小鼠存活率仍能達到70%。（2）在Wistar大鼠模型上的評價，實驗採用絕對致死劑量毒素(≥1 MLD)和多肽混勻後立即尾靜脈注射。當P1的劑量達到5.6mg/kg，可對受試大鼠提供100%保護。組織病理分析顯示，多肽可以抑制毒素對小鼠、大鼠腎的靶器官損傷。進一步的毒素在大鼠體內的代謝與組織分布研究結果顯示，多肽P1明顯干預125I-Stx2在大鼠體內的代謝規律與組織分布水平，干預組和攻毒組相比：0-4h，P1明顯降低了Stx2在大鼠血液中的濃度；72h檢測，125I-Stx2 cpm值在大部分組織中下降，尤其在鼻甲骨，腎上腺降低尤其明顯（P＜0.05），靶器官腎中Stx2分布水平減低50%以上，表明多肽可以加快毒素在體內的清除。流式細胞術分析結果表明，新型多肽有阻斷毒素與靶細胞表面的Gb3受體結合的功能，多肽P1（300 μmol/L）對FITC-Stx2BH與HeLa細胞結合的阻斷率為45.7%。同時125I-Stx2結合併內化入HeLa細胞的實驗，也發現相比較毒素孵育的細胞對照組，添加多肽可使結合併進入靶細胞的125I-Stx2水平明顯降低，從另一個角度闡釋多肽可阻抑125I-Stx2侵襲HeLa細胞的能力。
