《放射性同位素測量miRNA在腫瘤的表達及SPECT顯像研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由楊衛東擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：放射性同位素測量miRNA在腫瘤的表達及SPECT顯像研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：楊衛東
- 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
miRNA通過與靶基因3'非翻譯區（3'-UTR）互補結合而調節其表達，與腫瘤發生關係密切。準確測量其在腫瘤細胞和組織的表達具有重要意義，但現有方法操作複雜、無法進行活體監測。本研究利用 miRNA調節靶基因表達的原理, 以人鈉/碘泵(hNIS)作為報告基因，以let-7與其靶基因ras 基因作為研究對象，通過連線hNIS與ras基因3'-UTR並將其置於腫瘤特異性啟動子hTR下游，構建能在腫瘤特異表達並受let-7調節的hNIS基因。根據hNIS介導攝取99m-Tc的特徵，用放射性同位素測量報告基因在腫瘤細胞的表達, 並對其在腫瘤組織的表達進行SPECT顯像研究。本研究將建立新的、高靈敏測量miRNA在細胞表達的同位素方法, 為miRNA 的深入研究奠定基礎; 通過核醫學方法對miRNA在腫瘤組織的異常表達進行可視化研究, 建立以miRNA為腫瘤標誌物對腫瘤進行核醫學顯像的研究。
結題摘要
依據miRNA與靶基因3’-UTR互補結合而調節靶基因表達原理，本研究以人鈉/碘轉運體（hNIS）作為報告基因，分別克隆hNIS及可與let-7 互補結合的ras 基因的3’-UTR的序列（RU），連線構建受let-7調控的融合基因（hNIS-RU）。將hNIS及hNIS-RU分別轉染A549細胞，24小時後於培養液中分別加入25uCi的131I。由於131I可通過切倫科夫輻射產生光信號，分別對培養細胞進行放射性同位素測量，γ顯像及切倫科夫顯像（CLI），結果轉染hNIS的A549的131I攝取明顯增高，是未轉染A549 的12倍； 轉染hNIS-RU的A549細胞131I的攝取減低，為轉染hNIS的70%，是未轉染A549 的8倍，放射性同位素測量，γ顯像及切倫科夫顯像對131I攝取測量具有良好的相關性。為進一步驗證該法的特異性，克隆與RU特異結合的前體let-7(pri-let-7)及不與RU特異結合的前體mir-143(pri- mir143)，並將hNIS-RU分別與不同量的pri-let-7或pri- mir143共轉染A549細胞，加入131I分別進行放射性同位素測量，γ顯像及CLI，A549細胞共轉染hNIS-RU 與pri-let-7後，其對131I的攝取隨pri-let-7的增加而降低；而共轉染hNIS-RU與pri-mir143後，A549細胞對131I的攝取基本不變，表明該法具有較高的特異性。篩選穩定轉染的hNIS及hNIS-RU A549細胞，接種裸鼠製備動物模型，注射200uCi 99mTcO4-後1、2、4、12小時分別進行γ顯像，並於相應時間點處死荷瘤裸鼠，測量各臟器放射性分布。結果轉染hNIS-RU部位腫瘤顯影。體內生物學分布顯示2小時腫瘤顯影清晰轉染hNIS-RU的T/NT比值為2.87。 本研究依據miRNA與靶基因3’-UTR互補結合而調節靶基因表達原理，構建受let-7調控的融合基因（hNIS-RU）。利用hNIS介導攝取131I或99mTcO4-，成功對A549細胞及表達let-7進行了同位素測量與顯像，並對A549腫瘤let-7表達進行了核素顯像。該研究初步建立了以hNIS為報告基因，測量miRNA在腫瘤細胞或組織表達的高靈敏的放射性同位素新方法，既為miRNA的深入研究奠定了方法學基礎，也為腫瘤的診
