攜帶Lipocalin 2的雙靶向溶瘤腺病毒治療結腸癌幹細胞的研究

《攜帶Lipocalin 2的雙靶向溶瘤腺病毒治療結腸癌幹細胞的研究》是依託同濟大學，由徐彬擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：攜帶Lipocalin 2的雙靶向溶瘤腺病毒治療結腸癌幹細胞的研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：徐彬
• 依託單位：同濟大學

中文摘要

結腸癌發病率高，缺乏有效的治療手段。結腸癌幹細胞是結腸癌生長和轉移復發的根源，殺滅結腸癌幹細胞有望治癒結腸癌，然而目前缺乏針對治療結腸癌幹細胞的研究。攜帶治療基因的溶瘤腺病毒可通過感染方式進入腫瘤幹細胞，且對腫瘤幹細胞內的耐藥機制不敏感，因此具有潛在殺傷結腸癌幹細胞的作用。本實驗在前期構建的能靶向結腸癌而不損傷正常細胞的ZD55溶瘤腺病毒基礎上，進一步採用結腸癌幹細胞特異啟動子控制ZD55 E1A的表達，形成對結腸癌幹細胞雙重靶向的溶瘤腺病毒。同時將具有促腫瘤細胞調亡、抑制腫瘤血管生成、逆轉上皮細胞間質化等抗癌作用的Lipocalin 2基因插入到該雙靶向病毒中。所構建的新病毒的治療價值要遠優於單獨溶瘤腺病毒治療和單獨抗癌基因治療。它具有病毒的裂解和Lipocalin 2基因的協同殺傷結腸癌幹細胞的作用，可能為結腸癌的治療提供新的思路和方法。

結題摘要

結腸癌發病率高，急需尋找有效的治療手段。結腸癌幹細胞是結腸癌生長和轉移復發的根源，是治療的關鍵和難點，殺滅結腸癌幹細胞有望為結腸癌治療帶來新希望，然而目前針對治療結腸癌幹細胞的研究缺乏。攜帶治療基因的溶瘤腺病毒可通過感染方式進入腫瘤幹細胞，且對腫瘤幹細胞內的耐藥機制不敏感，因此具有潛在殺傷結腸癌幹細胞的作用。首先，通過比較多個不同的腫瘤特異性啟動子在結腸癌幹細胞（CD133+CD44+ HCT116細胞）中的活性，篩選得出Survivin腫瘤特異性啟動子在CD133+CD44+HCT116細胞中具有較強活性，而在正常細胞QSG7701中活性極低，故Survivin啟動子可用於調控基因轉錄，是能用於靶向結腸癌幹細胞治療的有效候選啟動子。因此採用Survivin啟動子控制E1A的表達，同時刪除腺病毒的E1B55區，這使得治療性腺病毒將通過兩重機制靶向腫瘤細胞而不損傷正常細胞。此外，由於腫瘤幹細胞表面柯薩奇病毒-腺病毒受體(CAR)的表達可能低於普通的腫瘤細胞，但是廣泛分布整合素。故將治療性腺病毒進行了更進一步重要的改造，將RGD序列插入到編碼腺病毒纖毛區的基因中，這使5型腺病毒不僅可以和柯薩奇病毒-腺病毒受體(CAR)結合，而且還能與腫瘤細胞表面廣泛分布的整合素結合，從而腺病毒能大量進入腫瘤幹細胞。我們將採用Survivin啟動子調控E1A，刪除E1B55區，含有RGD和過表達抗癌基因Lipocalin-2的溶瘤腺病毒命名為Ad-survivin-zd55-RGD-LCN2，經測序和Western-blot鑑定正確後進行體外細胞學實驗和體內動物學研究。結果均表明：Ad-survivin-zd55-RGD-LCN2對結腸癌幹細胞具有較強的殺傷作用，其殺傷作用具有時間依賴性和濃度依賴性，其對結腸癌的生長抑制作用與其產生的細胞裂解效應和促腫瘤細胞凋亡相關。