擬南芥轉基因

物種介紹

擬南芥是一種模式植物，多年來圍繞擬南芥的相關研究很多，尤其是對於擬南芥轉基因研究非常熱門，相關的論文也有很多。原因主要有以下幾個方面：

1 擬南芥是一種模式植物，基因組小，克隆其基因比較簡單。 　2 種植方便，條件易得。

3 擬南芥是自花傳粉植物，這樣既很容易進行遺傳分析。

4 方法簡單，不同於傳統的植物轉基因，不需要植物組織培養階段，對於實驗操作的要求不是很高。

當前擬南芥轉基因所使用的方法主要是農桿菌介導的轉化（載體法），區別主要是轉化的方法不同，有抽真空，花序浸染和噴霧法使用最為廣泛。

基本流程

農桿菌（目標載體）液的製備↘

擬南芥種植→花期（侵染）→共培養→收種→驗證

農桿菌製備

1)從-80℃冰櫃中取出lml農桿菌。

2)LB培養基中添加50mg/L的卡那黴素(Kan)和100mg/L的利福平(Rif)。

3)把lml農桿菌加入到含有Kan和Rif抗生素的LB培養基中，28℃振盪10h。

4）擬南芥轉基因浸潤液採用的是1/2MS，加蔗糖50g/L， PH值調至5.7。然後在15p壓力下蒸汽滅菌15min，滅菌結束，冷卻後保存於4℃，以待轉基因使用。

轉化

抽真空/花序浸染/噴霧法

其中抽真空法轉化效率最高，但是步驟麻煩，而且要將擬南芥倒置浸染到菌液中，操作不方便。噴霧法相比來說簡便易行，而且進行重複浸染，可以提高轉化效率。

驗證

1.種子篩選，將收到的種子種植於含有篩選劑（卡那黴素/潮黴素等）的培養基上，篩選出抗性幼苗。

2.PCR,提取擬南芥基因組，進行PCR擴增，核酸電泳觀察有無目的基因。