插入序列選擇

簡介
插入序列選擇insertion seyuc}ncc aele}tinn一種從普通的細胞群中仄別和選擇經基因操作插人f外7}基因的細胞的方法:如果沒有抗生素耐藥性的標記物可用,而插入的序列包含有一個生物合成途徑的酶的密碼,則可用遺傳選擇的方法、用載體來感染突變體細胞,這些細胞不能生長或產生一個可供辨認的代謝物(如一種色素):加入的基因補足了突變宿主的缺陷,而只有已轉型約細胞才能牛長或產生特殊的代謝物。這樣,這些細胞就能被分離井大量生長免疫化學法也可用於檢測出能夠合成外源蛋白質的克隆,備一個影印培養平皿,然後細胞被溶解並從陽性菌落中釋放出杭原。再把一片載有抗休的聚乙烯膜放在平皿表面井與之接觸、抗原抗體複合物的位置,也就是原始平皿上轉型菌落的位置,如把平皿與作了同位素標記(如‘zsI}的[以G反應之後,即日f用放射自顯影術檢測了。把影印培養平皿轉印到硝化纖維濾紙或尼龍膜上,細胞也可被鑑別。在用鹼和蛋白酶處理後,細胞被除去,但變性的I}NA遺留並附著在濾紙(膜)上二進行gory烘乾Lei定或紫外固定後,再和有放射性的核酸探針雜交的位置即可利用放射自顯影術檢測。

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