《慢病毒載體在成年胰島產生機制研究新策略中的套用》是依託汕頭大學，由魏熾炬擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：慢病毒載體在成年胰島產生機制研究新策略中的套用
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：魏熾炬
- 依託單位：汕頭大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
成年胰腺中存在多種細胞形態，如胰島、胰管和腺泡，各細胞種類之間又可發生複雜的轉分化現象。本研究通過構建一種新型的細胞標記技術和建立新的胰腺注射模型，實現對胰腺各細胞種類的追蹤，從而闡明成年胰腺的發育機制，為糖尿病的治療探索新的途徑。我們擬在已有的基礎上，開展如下研究：（1）一種基於慢病毒載體的新型細胞追蹤技術的建立，包括：以重組酶（Cre、Flp）、重組位點（Lox、Frt）、報告基因（EGFP、DsRed）和胰腺特異啟動子為元件組裝成的慢病毒載體，慢病毒顆粒的大批量生產及濃縮，載體特異性標記胰腺細胞的體外檢測；（2）兩種小鼠胰腺慢病毒灌注模型的建立，包括：胰管灌注模型的建立及檢測，胰腺動脈灌注模型的建立及檢測；（3）成年胰腺發育及胰島質量維持機理研究，包括：鑑定通過胰管內幹細胞分化形成的新胰島，鑑定通過現有胰島分裂產生的胰島，研究胰腺再生模型中胰島的產生機制。
結題摘要
本項目經課題組成員三年來的努力工作，已順利完成或超過預定目標，取得的主要成果匯報如下： 1. 建立小鼠胰腺動脈腺病毒載體灌注途徑，其中，百分之六十的Beta細胞表達報告基因，實驗結果同時表明，胰島特異性表達Sirt1基因，可以保護胰島Beta細胞免受鏈尿黴素誘導的凋亡。研究成果已發表在著名雜誌Molecular Therapy 2011 2. 首次發現煙酸受體PUMA-G在小鼠胰島Beta細胞上的表達，並且，其信號通路可以調控胰島素的表達，研究結果已發表在Pancreas 2011 3. 利用生物聚酯材料PHBHHx製備微米顆粒，並將腺病毒載體吸附於其表面，研究表明，該複合物可以介導胰腺毛細血管的基因轉移，研究結果已發表在Journal of Gene Medicine 2012 4. 與協和大學的韓代書教授合作，研究LPS對巨噬細胞吞噬作用的影響，研究結果已發表在Immunology 2011 5. 與印度細胞科學國家中心的Hardikar教授合作，建立了單細胞定量檢測miRNA表達技術，研究結果已發表在Cold Spring Harbor Protocol, 2010 6. 利用PCR技術，對重組酶Cre進行點突變，將173位置的胺基酸從精氨酸變為組氨酸，降低了Cre的酶活性，從而達到提高胰島素啟動子的組織特異性。研究結果正在整理，準備投稿。 7. 該結果同時申請了一項國內發明專利：DNA 重組酶Cre 基因的改造、重組蛋白表達方法及套用。專利申請號：20111029620.2。 8．構建表達胰腺發育關鍵轉錄因子的腺病毒載體，並用以誘導臍帶間充質幹細胞的誘導，研究結果正在整理，準備投稿。 9．構建了可誘導表達VSV-G的Ad293細胞株，利用脂質體擠壓技術，成功地實現了蛋白質向細胞的轉移，研究結果具有重要意義，為將來的基金申請打下基礎。 10. 構建了NF-kB報告基因，發現PUMA-G的信號可以抑制NF-kB的激活，可能有助於保護Beta細胞，研究結果具有重要意義，為將來的基金申請打下基礎。 11. 本項目的順利進行，幫助成功申請了國家自然科學基金面上項目1項，和廣東省重點基金1項。
