《惡性膠質瘤發生、侵襲過程中Brevican的作用及其機制的研究》是依託復旦大學，由於敏擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：惡性膠質瘤發生、侵襲過程中Brevican的作用及其機制的研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：于敏
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
短蛋白聚糖(Brevican)是近年來新發現的一種中樞神經系統特有的硫酸軟骨素蛋白聚糖，是腦內最豐富的細胞外基質（ECM）成份之一，在惡性膠質瘤發生時呈特異的高度表達。通常情況下，神經系統的ECM由不利於細胞遷移的透明質酸(HA)等構成骨架,是中樞神經細胞生長、遷移的屏障。但是，膠質瘤發生時，與HA結合的Brevican卻表達上調，並促進了膠質瘤的侵襲、蔓延生長；目前Brevican的具體作用及機制尚未明確。本研究採用免疫組織化學技術、模式生物斑馬魚的移種腫瘤以及膠質瘤細胞系RNA干擾等手段，對不同惡性程度的膠質瘤組織中Brevican表達情況分析、斑馬魚膠質瘤形成過程進行全程實時監控、細胞Brevican基因干擾後粘附、侵襲能力改變等進行研究，以闡明Brevican在膠質瘤形成中的具體作用及其與惡性程度、侵襲之間的關係，為明確Brevican作為膠質瘤的腫瘤標誌以及膠質瘤的防治奠定基礎。
結題摘要
本課題首系統地檢測了Brevican分子在腦膠質瘤及良性對照組（腦膜瘤和無激素垂體瘤）中的表達特徵，揭示了Brevican表達與腦膠質細胞瘤之間存在的關聯，特別是其與病理分級、分化程度和侵襲程度的關係。我們發現，Brevican的表達主要定位於膠質瘤細胞的細胞漿和細胞周圍即細胞外基質中，瀰漫表達，呈均質狀或細顆粒狀。在良性對照組中表達量（22.5%，9/40）很低，而在膠質瘤中表達水平則較高，陽性率可達68.3%（41/60），而且隨著膠質瘤惡性程度（從I級的毛細胞型膠質瘤至IV級的膠母型膠質瘤）的提高，其陽性率逐級增高，且免疫組化的陽性積分也逐級升高。建立了Brevican穩定過表達igzbiaoda下調的U251-Brevican（“TU251細胞”）和293T-Brevican細胞株。實驗發現U251-Brevican表達上調細胞的遷移能力明顯增強。同時在Brevican knockdown的細胞，CCK-8和克隆形成試驗均證明其增殖能力下降；細胞免疫螢光顯示細胞之間的伸展能力下降，進一步通過損傷修複試驗（Wound-healing assay）也證實其蔓延能力明顯較對照組降低；穿透Marigel的能力也變弱。研究發現，在Brevican表達抑制的TU251細胞被EGF激活後，Erk1/2、JNK磷酸化水平都由於Brevican的表達下調而低於相應對照組的TU251-ShDNA mock細胞，表明Brevican參與了對MAPKs磷酸化的調節；同時，我們的實驗也表明，Brevican knockdown 細胞中Akt的磷酸化水平也明顯低於對照的TU251-ShDNA mock細胞。這很有可能是通過上游的Akt信號通路活性受到抑制而起作用。建立了Brevican抑制表達的細胞（TU251- pSuper- ShDNA 2 細胞）和對照組（TU251-pSuper-ShDNA mock、TU251未處理）細胞株，通過皮下接種，觀察、比較這兩組之間致瘤性的差別。腦膠質瘤動物體內成瘤實驗表明， RNA干擾後，Brevican表達下調，Brevican蛋白水平降低與膠質瘤的形成、擴展的密切密切相關。本課題的研究成果表明，Brevican有望成為有效的腦膠質細胞瘤診斷標記物和基因治療靶點。
