急性髓系白血病中長鏈非編碼RNA LLEST功能的研究

《急性髓系白血病中長鏈非編碼RNA LLEST功能的研究》是依託蘇州大學，由祁小飛擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：急性髓系白血病中長鏈非編碼RNA LLEST功能的研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：祁小飛
• 依託單位：蘇州大學

項目摘要

急性髓系白血病的發生和轉化的原因對於白血病的臨床診斷和治療非常重要，尚存在近50%的急性髓系白血病病例，沒有明確的診治的分子靶標。非編碼RNA能影響癌基因和抑癌基因的功能，在腫瘤的發生和發展中起重要作用。前期研究篩選鑑定得到長鏈非編碼RNA-LLEST在急性髓系白血病CD34+細胞有特異性的表達態勢。小樣本預實驗發現該基因可以抑制腫瘤細胞增殖,並與腫瘤負荷呈負相關，可能是抑制細胞惡性轉化的關鍵調控因子。為了進一步研究LLEST 這一長鏈非編碼RNA在急性髓系白血病中的功能，本研究擬通過細胞和動物模型，分別在體外和體內研究該非編碼RNA的功能，揭示其抑制細胞惡性化的作用機制，闡明該分子作為診斷和治療的分子靶點的可行性。這對於急性髓系白血病的發生和轉化機制的研究和套用具有重要科學意義。

結題摘要

研究背景及主要研究內容 我們課題組通過基因晶片和外顯子測序鑑定得到了一些與急性髓系白血病發生及發展有關的基因，LLEST是其中一個長鏈非編碼RNA (Long non-coding RNA, lncRNA)，功能尚屬未知。國內外尚未見該分子在腫瘤尤其是急性髓性白血病發生和發展中的作用的報導。本研究通過細胞和動物模型，分別在體外和體內進一步研究LLEST的功能，揭示其抑制細胞惡性化的作用機制，闡明該分子作為急性髓系白血病診斷和治療的分子靶點的可行性。 研究的臨床意義 我們的研究發現，與正常人相比，LLEST基因在慢性再生障礙性貧血病例骨髓CD34+細胞中呈高表達態勢，而在良性血液病向惡性血液病轉變過程中表達量逐漸降低，直至急性髓系白血病（AML）CD34+細胞中不表達。本研究相關結果提示，LLEST在M2中的表達量與腫瘤負荷成反比關係，腫瘤負荷越多，LLEST表達量越低。跟蹤隨訪顯示LLEST 表達水平的高低與疾病的復發具有相關性。對LLEST進行體內外功能實驗發現，高表達LLEST能引起細胞G2期阻滯，並誘導細胞凋亡，從而顯著抑制細胞的生長；LLEST的高表達還能引起細胞分化的增加，無論是隨機分化還是TPA定向誘導分化。 我們通過表達譜晶片篩選獲得了在LLEST穩定高表達的K562細胞株中表達與對照有差異的基因。共有包括BCL2、WNT、XIAP等基因在內的1613個基因表達有差異。進一步我們通過生物信息學分析，預測了LLEST作用的可能基因，共1520個基因可能含有LLEST作用的位點。在這兩個數據集中共有11個基因趨勢一致，包括：BCL2, XIAP, FZD, DSC3等。生物信息學顯示，BCL2的3’UTR含有LLEST作用位點GCCTGTA。為了驗證生物學分析的結果，我們將BCL2 的3’UTR克隆進含有螢光素酶報告基因的載體pGL3中，並同時轉染LLEST。結果顯示，LLEST確實能和BCL2的3’UTR發生相互作用，引起BCL2的表達明顯下降。並激活capase-9等凋亡通路，誘導凋亡。小鼠移植中亦證實了LLEST高表達組BCL2明顯下降。 綜上，本研究發現提示LLEST基因可能在白血病發生及轉歸過程中發揮著重要的作用。