《急性有機磷酸酯類殺蟲劑中毒事件衛生應急處置技術方案》是東莞市衛生和計畫生育局2011年制定的一項方案。
1概述
有機磷酸酯類殺蟲劑多為易揮發的油狀液體，多數有蒜臭，易溶於多種有機溶劑，多不溶於或微溶於水，遇鹼性物質易分解破壞。常見本類殺蟲劑的理化性質和毒性見附屬檔案 1。
有機磷酸酯類殺蟲劑可通過呼吸道、皮膚、黏膜和胃腸道吸收。常見接觸機會有：生產、包裝、貯存、搬運、供銷等環節；配製、噴灑、塗莖、施藥工具修理等使用環節；誤服、誤用或投毒等。
2中毒事件的調查和處理
現場救援時首先要確保工作人員安全，同時要採取必要措施避免或減少公眾健康受到進一步傷害。現場救援和調查工作要求必須 2 人以上協同進行。
2.1 現場處置人員的個體防護
調查和處理經呼吸道和皮膚、黏膜途徑中毒的事件時，如為密閉或半密閉中毒現場，並且出現昏迷/死亡病例或死亡動物，或者有機磷酸酯類殺蟲劑泄漏未得到控制，必須使用自給式空氣呼吸器（SCBA）、B級防護服、化學防護手套、化學防護靴；進入已經開放通風的中毒現場，須選用可防 A 類氣體和至少 P2 級別顆粒物的全面型呼吸防護器（參見GB 2890-2009），C 級防護服、化學防護手套和化學防護靴。
調查和處理經口途徑中毒事件時，一般不必穿戴個體防護裝備。現場採集可疑中毒食品樣品時，須選用可防 A 類氣體和至少 P2 級別顆粒物的全面型呼吸防護器，佩戴化學防護手套和化學防護靴，防護服無特殊要求。 現場救援人員給皮膚污染的中毒病人洗消時，應選用可防 A 類氣體和至少 P2 級別顆粒物的全面型呼吸防護器，佩戴化學防護手套和化學防護靴，防護服無特殊要求。
醫療救護人員在現場醫療區救治中毒病人時，一般不必穿戴個體防護裝備。
2.2 中毒事件的調查
調查人員到達中毒現場後，應先了解中毒事件的概況，然後進行中毒事件相關場所、人員等調查工作，並及時向中毒事件指揮部提出收集並封存所有可疑中毒食品以及其他可能導致本次中毒事件物品，事件現場控制措施（如通風、切斷危害源等）、救援人員的個體防護、現場隔離帶設定、人員疏散等方面的建議。
2.2.1 中毒事件相關場所的調查
經呼吸道和皮膚、黏膜途徑中毒事件的調查內容包括中毒現場環境狀況、氣象條件、通風措施、生產工藝流程、防護條件、接觸人員情況等。經口途徑中毒事件的調查對象為中毒事件涉及的食品生產、加工至食用整個過程的各個場所，調查內容包括食品加工過程（包括原料和配料、調料、食品容器、使用的工具），食品的分裝、儲存的條件等。
2.2.2 中毒事件相關人員的調查。
調查對象包括中毒病人、目擊證人及其他相關人員。調查內容包括了解中毒事件發生經過，中毒人員的接觸時間、地點、途徑以及物質種類，中毒人數、姓名、性別、工種，中毒的主要症狀，中毒事件的進展情況、已經採取的緊急措施等。同時，還應向臨床救治單位進一步了解相關資料（如搶救過程、臨床治療資料、實驗室檢查結果等）。
對現場調查的資料作好記錄，進行現場拍照、錄音等。取證材料要有被調查人的簽字。
2.3 現場中毒樣品的快速檢測
中毒事件現場採集的可疑中毒食物及中毒病人的嘔吐物、胃內容物、以及血液等樣品可在現場進行定性檢測。如懷疑有機磷酸酯類農藥中毒時，可使用酶化學紙片法快速檢測蔬菜等食品和嘔吐物中有機磷酸酯類農藥殘留量（附屬檔案 2）。有條件可使用速測卡法（紙片法）和酶抑制率法（分光光度法）測定蔬菜等食品中有機磷酸酯類農藥殘留（附屬檔案 3和 4）；可使用硫代乙醯碘代膽鹼-二硫雙一硝基苯甲酸法測定中毒病人全血膽鹼酯酶的活性（GBZ 52-2002 附錄 B）。
2.4 中毒事件的確認和鑑別
2.4.1 中毒事件的確認標準
同時具有以下三點，可確認為急性有機磷酸酯類殺蟲劑中毒事件：
a）中毒病人有有機磷酸酯類殺蟲劑接觸機會；
b）中毒病人出現以毒蕈鹼樣、菸鹼樣和中樞神經系統症狀為主的臨床表現；
c）中毒現場採樣樣品中有機磷酸酯類殺蟲劑含量增高，實驗室檢查全血膽鹼酯酶活性降低。
2.4.2 中毒事件的鑑別
應注意與急性氨基甲酸酯類殺蟲劑中毒事件、中暑等事件進行鑑別。
2.5 現場醫療救援
經呼吸道和皮膚、黏膜途徑的中毒病人應立即移離中毒現場至空氣新鮮處，保持呼吸道通暢，脫去被污染衣服，用肥皂水或清水徹底清洗污染的皮膚（包括皺褶部位）、毛髮。經口途徑中毒意識清晰的病人，應立即進行催吐。當出現大批中毒病人，應首先進行現場檢傷分類，優先處理紅標病人。
2.5.1 現場檢傷分類
a） 紅標，具有下列指標之一者：意識障礙；咯大量泡沫樣痰。
b） 黃標，具有下列指標者：肌顫。
c） 綠標，具有下列指標者：出現頭暈、頭痛、噁心、嘔吐、多汗、胸悶、視物模糊、無力等症狀。
D）黑標，同時具備下列指標者：意識喪失，瞳孔散大，無自主呼吸，大動脈搏動消失。
2.5.2 現場醫療救援
紅標病人立即吸氧、建立靜脈通道，保持呼吸道通暢，靜脈注射5mg～10mg 的阿托品，10min～15min 可根據病情重複給藥。有條件可肌肉注射 0.5g～1.0g 的氯解磷定。黃標病人應密切觀察病情變化。出現呼吸節律明顯不規律、窒息或嚴重缺氧克等情況時，及時採取對症支持措施。綠標病人可暫不予特殊處理，觀察病情變化。
2.5.3 病人轉送
中毒病人經現場急救處理後，應立即就近轉送至綜合醫院或中毒救治中心繼續觀察和治療。
3中毒樣品的採集與檢測
3.1 採集樣品的選擇
可能導致中毒的食物和血液是首選樣品。另外，可根據中毒事件的現場調查結果，確定還應採集的其它樣品種類。
3.2 樣品的採集方法
固體食品和半流質食品使用具塞玻璃瓶或聚乙烯瓶密閉盛放，採樣量 50g～100g；液體樣品（血液除外）使用具塞玻璃瓶或聚乙烯瓶盛放，採樣量 300ml～500ml；採集血液樣品前必須注意清洗皮膚表面，防止污染，使用具塞的肝素抗凝試管盛放，採樣量 5ml～10ml。
3.3 樣品的保存和運輸
所有樣品採集後最好在 4℃條件下冷藏保存和運輸，如無條件冷藏保存運輸，樣品應在採集後 24h 內進行實驗室檢測。所有實驗室檢測完畢的樣品，應在冷凍條件下保存一周，以準備實驗室覆核。
3.4 推薦的實驗室檢測方法
a） 全血膽鹼酯酶活性測定法——硫代乙醯碘代膽鹼-二硫雙一硝基苯甲酸法（GBZ 52-2002 附錄 B）。
b） 植物性食品中有機磷和氨基甲酸酯類農藥多種殘留的測定（GB/T 5009.145-2003）
c） 食品、毒餌、飲水、嘔吐物等樣品中的有機磷農藥可採用火焰光度檢測器（FPD）毛細管氣相色譜法分離和測定（附屬檔案 5）。
d） 水果和蔬菜中 500 種農藥及相關化學品殘留的測定 GC-MS 法（GB/T 19648-2006）。
e） 糧谷中 372 種農藥及相關化學品殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法（GB/T 20770-2006）。
f） 蜂蜜、果汁和果酒中 420 種農藥及相關化學品殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法（GB/T 20771-2006）。
g） 動物肌肉中 461 種農藥及相關化學品殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法（GB/T 20772-2008）。
4醫院內救治
4.1 病人交接
中毒病人送到醫院後，由接診醫護人員與轉送人員對中毒病人的相關信息進行交接，並簽字確認。
4.2 診斷和診斷分級
救治醫生對中毒病人或陪護人員進行病史詢問，對中毒病人進行體格檢查和實驗室檢查，確認中毒病人的診斷，並進行診斷分級。
4.2.1 診斷分級
a）觀察對象 具有下列表現之一者：
i 全血或紅細胞膽鹼酯酶活性在70%以下，尚無明顯中毒的臨床表現；
ii 有輕度的毒蕈鹼樣自主神經症狀和（或）中樞神經系統症狀，而全血或紅細胞膽鹼酯酶活性在70%以上。
b）輕度中毒 短時間內接觸較大量有機磷殺蟲劑後，在 24h 內出現較明顯的毒蕈鹼樣自主神經和中樞神經系統症狀，如頭暈、頭痛、乏力、噁心、嘔吐、多汗、胸悶、視物模糊、瞳孔縮小等。全血或紅細胞膽鹼酯酶活性一般在 50%-70%。
c）中度中毒 在輕度中毒基礎上，出現肌束震顫等菸鹼樣表現。全血或紅細胞膽鹼酯酶活性一般在 30%-50%。
d）重度中毒 除上述膽鹼能興奮或危象的表現外，具有下列表現之一者，可診斷為重度中毒：
i 肺水腫；
ii 昏迷；
iii 呼吸衰竭；
iv 腦水腫。
全血或紅細胞膽鹼酯酶活性一般在 30%以下。
4.2.2 中間期肌無力綜合徵
在急性中毒後 1～4 天左右，膽鹼能危象基本消失且意識清晰，出現肌無力為主的臨床表現者。
a）輕型中間期肌無力綜合徵 具有下列肌無力表現之一者：
i 屈頸肌和四肢近端肌肉無力，腱反射可減弱；
ii 部分腦神經支配的肌肉無力。
b）重型中間期肌無力綜合徵
在輕型中間期肌無力綜合徵基礎上或直接出現下列表現之一者：
i 呼吸肌麻痹；
ii 雙側第IX對及第X對腦神經支配的肌肉麻痹造成上氣道通氣障礙者。高頻重複刺激周圍神經的肌電圖檢查，可引出肌誘發電位波幅呈進行性遞減。全血或紅細胞膽鹼酯酶活性多在 30%以下。
4.3 治療
接收醫院對所接收的中毒病人確認診斷和進行診斷分級後，根據病情的嚴重程度將病人送往不同科室進行進一步救治。觀察對象可在觀察室留觀，輕、中度中毒病人送入普通病房住院治療，重度中毒病人立即送至危重症監護病房搶救。
4.3.1 清除毒物
脫去中毒病人污染的衣物，可用肥皂水清洗污染的皮膚、毛髮和指甲。眼部污染可用生理鹽水反覆沖洗。經口中毒不足 24h 的病人均要進行洗胃，中毒 24h 以上者可根據病情選擇是否洗胃。應反覆洗胃，直至洗胃液清亮、無味為止。重度中毒病人可保留洗胃管 12h～24h，以便病情需要時再次進行洗胃。洗胃後可給予導瀉治療。
4.3.2 特效解毒劑
a） 阿托品:為短效抗膽鹼藥物，對緩解毒蕈鹼樣症狀和對抗呼吸中樞抑制有效，但對菸鹼樣症狀和膽鹼酯酶活性恢復無效。輕度中毒首次劑量 1mg～2mg 肌內注射，1h～2h 後可重複一次，以後酌情減量並延長間隔時間。中度中毒首次劑量 2mg～4mg，肌內或靜脈注射，0.5h 後可重複一次，“阿托品化”後酌情減量並延長間隔時間。重度中毒首次劑量一般為 5mg～10mg 靜脈注射，如 5min 未起作用，立即重複 5mg 靜脈注射，以後每隔 10min～30min 給藥一次，每次 2mg～5mg，達到“阿托品化”後減量維持“阿托品化”24h 以上，逐漸減量停藥。
阿托品化是指臨床出現瞳孔擴大、口乾、肺部濕囉音明顯減少或消失、皮膚乾燥以及心率加快等表現。“阿托品化”應綜合判斷，不能僅靠一兩項指征判定。
b） 鹽酸戊乙奎醚（長托寧）：為中長效抗膽鹼藥物，可拮抗中樞中毒症狀和外周的毒蕈鹼樣中毒症狀，但對膽鹼酯酶活性恢復無效。用藥方法為肌內注射，首次使用劑量：輕度中毒為 1mg～2mg，中度中毒為2mg～4mg，重度中毒為 4mg～6mg。以後，根據病情確定給藥劑量和使用時間。鹽酸戊乙奎醚對心率影響較小，使用本藥物時不能以心率變化來確認是否用藥充足。
c） 膽鹼酯酶復能劑：對緩解菸鹼樣症狀有效，常用藥物有氯解磷定和碘解磷定。氯解磷定的用量和用法如下：輕度中毒首次劑量 0.5 g 肌內注射，2h～3h 後可重複一次；中度中毒首次劑量 0.5g～0.75g 肌內注射或緩慢靜脈注射，1h～2h 後重複注射一次，以後酌情減量套用；重度中毒 1.0g～1.5g 緩慢靜脈注射，0.5h 後可重複一次，以後每 1h～2h給藥 0.5g，但 24h 用量一般不超過 10g，病情好轉後酌情減量並延長間隔時間。如無氯解磷定，可選用碘解磷定，兩種藥物的劑量換算為：1g氯解磷定約相當於碘解磷定 1.5g。
4.3.3 對症支持治療
保持呼吸道通暢、加強營養、合理膳食，注意水、電解質及酸鹼平衡，防治繼發感染。密切監護心、腦、肺、肝、胰等重要臟器功能，及時給予相應的治療措施。
出現中間期肌無力綜合徵後，應在治療急性中毒的基礎上，密切觀察病情變化，以對症和支持治療為主。出現呼吸肌麻痹時，及時建立人工氣道，給予機械通氣，維持呼吸功能，同時積極防治併發症。
5 應急反應的終止
中毒食品和其他可疑毒物已經完全收繳和銷毀，中毒相關危險因素已被有效控制，未出現新的中毒病人且原有病人病情穩定 24h 以上。
附屬檔案2.酶化學紙片法快速檢測食品和嘔吐物中
有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留量
1 適用範圍
本方法適用於食品和嘔吐物中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留量的快速篩選測定。該方法定值是以限量的形式出現，僅供篩查，可用其它分析方法進一步確定具體農藥品種和含量。
2 原理
有機磷及氨基甲酸酯類農藥能抑制血液中膽鹼脂酶活性，在正常的生理條件下，膽鹼脂酶能使乙醯膽鹼水解成醋酸和膽鹼，因而pH值變低，當有機磷及氨基甲酸酯類中毒以後，血液中的膽鹼脂酶活性受到抑制，乙醯膽鹼水解成醋酸和膽鹼的能力變低，而使pH值變高。根據pH值的變化，以溴麝香草酚蘭為指示劑判斷是否有機磷及氨基甲酸酯類中毒。
3 主要性能指標
檢測靈敏度：（5～10）μg/10g 樣品
4 試劑
4.1 三氯甲烷（用 10ml 安瓿包裝）。
4.2 溴水（或 1ml 安瓿包裝）溶液：1ml 飽和溴水加水 4ml,混勻即成。
4.3 血清或乾燥血清:馬血清可直接使用,如果幹燥馬血清，可按瓶簽上標明的情況加水稀釋後用。也可使用健康人血清和鴨血清。
4.4 乙醯膽鹼紙片：稱取氯化乙醯膽鹼 1g，溴麝香草酚蘭 0.084g，溶於 30ml95%乙醇。取定量濾紙，一張一張地浸泡在上述溶液中，取出晾乾，剪成 2cm×2cm 的小方塊備用。
5 分析步驟
取切碎試樣 10g 左右於具塞三角瓶中，加三氯甲烷 10ml～20ml，振搖數分鐘過濾，取濾液 1ml～2ml 於蒸發皿中揮乾，加水 1ml 用玻棒充12分磨擦皿壁，使其充分溶解，如果是甲拌磷和對硫磷，則需加溴水氧化，然後用滴管吸取上述液體滴 1 滴（約 0.05ml）於白磁板上，另加馬血清1 滴（約 0.05ml）混合作用半分鐘，加蓋乙醯膽鹼紙片一張，10min～20min 後觀察紙片顏色。同時用水作空對照試驗。
6 結果判定
陽性結果：呈綠或藍色
陰性結果：黃色。
7 注意事項
7.1 本法以 pH 值改變判斷結果，應避免酸鹼因素的干擾，白磁板用前清洗乾淨，吹乾。
7.2 經試驗馬血清在冰櫃中保存 2 年，其活性不影響測定結果，密封乾燥馬血清在低溫保存 2 年其活性也不影響測定效果。
7.3 用溴水氧化甲拌磷和對硫磷後可提高靈敏度，以（1+5）飽和溴水 1滴氧化 1ml 檢液為宜。
7.4 乙醯膽鹼試紙片應避光，乾燥保存。
7.5 乙醯膽鹼紙片最好使用氯化乙醯膽鹼。
7.6 可使用符合以上要求的酶試劑條產品。
附屬檔案3.速測卡法（紙片法）快速檢測蔬菜中
有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留量參照（GB/T 5009.199─2003）
1 適用範圍
本方法準適用於蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留量的快速篩選測定。該方法定值是以限量的形式出現，所以，在有條件的單位，可用氣相色譜儀對陽性試樣進行進一步的實驗來確定是哪種農藥和確切含量。
2 原理
膽鹼酯酶可催化靛酚乙酸酯（紅色）水解為乙酸與靛酚（藍色），有機磷或氨基甲酸脂類農藥對膽鹼酯酶有抑制作用，使催化、水解、變色的過程發生改變，由此可判斷出樣品中是否有高劑量有機磷或氨基甲酸酯類農藥的存在。
3 試劑
3.1 固化有膽鹼酯酶和靛酚乙酸酯試劑的紙片（速測卡）。
3.2 pH7.5 緩衝溶液：分別取 15.0g磷酸氫二鈉 [Na2HPO4·12H2O]與1.59g無水磷酸二氫鉀[KH2PO4]，用 500ml蒸餾水溶解。
4 儀器
4.1 常量天平。
4.2 有條件時配備 37℃±2℃恆溫裝置。
5 分析步驟
5.1 整體測定法
a）選取有代表性的蔬菜樣品，擦去表面泥土，剪成 1cm 左右見方碎片，取 5g 放入帶蓋瓶中，加入 10ml 緩衝溶液，振搖 50 次，靜置 2min以上。
b） 取一片速測卡，用白色藥片沾取提取液，放置 10min 以上進行預反應，有條件時在 37℃恆溫裝置中放置 10min。預反應後的藥片表面必須保持濕潤。
c） 將速測卡對摺，用手捏 3min 或用恆溫裝置恆溫 3min，使紅色藥片與白色藥片疊合發生反應。
d） 每批測定應設一個緩衝液的空白對照卡。
5.2 表面測定法（粗篩法）
a） 擦去蔬菜表面泥土，滴 2～3 滴緩衝溶液在蔬菜表面，用另一片蔬菜在滴液處輕輕摩擦。
b） 取一片速測卡，將蔬菜上的液滴滴在白色藥片上。
c） 放置 10min 以上進行預反應，有條件時在 37℃恆溫裝置中放置10min。預反應後的藥片表面必須保持濕潤。
d） 將速測卡對摺，用手捏 3min 或用恆溫裝置恆溫 3min，使紅色藥片與白色藥片疊合發生反應。
e） 每批測定應設一個緩衝液的空白對照卡。
6 結果判定
結果以酶被有機磷或氨基甲酸酯類農藥抑制（為陽性）、未抑制（為陰性）表示。與空白對照卡比較，白色藥片不變色或略有淺藍色均為陽性結果。白色藥片變為天藍色或與空白對照卡相同，為陰性結果。對陽性結果的樣品，可用其它分析方法進一步確定具體農藥品種和含量。
7 附則
7.1 速測卡技術指標
7.1.1 靈敏度指標：速測卡對部分農藥的檢出限見下表。
部分農藥的檢出限
7.1.2 符合率：在檢出的 30 份以上陽性樣品中，經氣相色譜法驗證，陽性結果的符合率應在 80%以上。
8 說明
8.1 蔥、蒜、蘿蔔、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有對酶有影響的植物次生物質，容易產生假陽性。處理這類樣品時，可採取整株（體）蔬菜浸提或採用表面測定法。對一些含葉綠素較高的蔬菜，也可採取整株（體）蔬菜浸提的方法，減少色素的干擾。
8.2 當溫度條件低於 37℃，酶反應的速度隨之放慢，藥片加液後放置反應的時間應相對延長，延長時間的確定，應以空白對照卡用手指（體溫）捏 3min 時可以變藍，即可往下操作。注意樣品放置的時間應與空白對照卡放置的時間一致才有可比性。空白對照卡不變色的原因：一是藥片表面緩衝溶液加的少、預反應後的藥片表面不夠濕潤，二是溫度太低。
8.3 紅色藥片與白色藥片疊合反應的時間以 3min 為準，3min 後的藍色會逐漸加深，24h 後顏色會逐漸退去。
附屬檔案4.酶抑制率法（分光光度法）定量檢測蔬菜中
有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留量參照（GB/T 5009.199─2003）
1 適用範圍
本方法準適用於蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農藥殘留量的快速定量測定。該方法定值是以抑制率的形式出現，可用其它分析方法進一步確定具體農藥品種和含量。
2 原理
在一定條件下，有機磷和氨基甲酸酯類農藥對膽鹼酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率與農藥的濃度呈正相關。正常情況下，酶催化神經傳導代謝產物（乙醯膽鹼）水解，其水解產物與顯色劑反應，產生黃色物質，用分光光度計在 412nm 處測定吸光度隨時間的變化值，計算出抑制率，通過抑制率可以判斷出樣品中是否有高劑量有機磷或氨基甲酸酯類農藥的存在。
3 試劑
3.1 pH8.0 緩衝溶液
分別取 11.9g 無水磷酸氫二鉀與 3.2g 磷酸二氫鉀，用 1000ml 蒸餾水溶解。
3.2 顯色劑
分別取 160mg 二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）和 15.6mg 碳酸氫鈉，用 20ml 緩衝溶液溶解，4℃冰櫃中保存。
3.3 底物
取 25.0mg 硫代乙醯膽鹼，加 3.0ml 蒸餾水溶解，搖勻後置 4℃冰櫃中保存備用。保存期不超過兩周。
3.4 乙醯膽鹼酯酶
根據酶的活性情況，用緩衝溶液溶解，3min的吸光度變化ΔA0值應控制在 0.3 以上。搖勻後置 4℃冰櫃中保存備用，保存期不超過四天。可選用由以上試劑製備的試劑盒。乙醯膽鹼酯酶的ΔA0值應控制在0.3 以上。
4 儀器
4.1 分光光度計或相應測定儀。
4.2 常量天平。
4.3 恆溫水浴或恆溫箱。
5 分析步驟
5.1 樣品處理：選取有代表性的蔬菜樣品，沖洗掉表面泥土，剪成 1cm左右見方碎片，取樣品 1g，放入燒杯或提取瓶中，加入 5ml 緩衝溶液，振盪 1min～2min，倒出提取液，靜置 3min～5min，待用。
5.2 對照溶液測試：先於試管中加入 2.5ml緩衝溶液，再加入 0.lml酶液、0.1ml顯色劑，搖勻後於 37℃放置 15min以上（每批樣品的控制時間應一致）。加入 0.lml底物搖勻，此時檢液開始顯色反應，應立即放入儀器比色池中，記錄反應 3min的吸光度變化值ΔA0。
5.3 樣品溶液測試：先於試管中加入 2.5ml樣品提取液，其它操作與對照溶液測試相同，記錄反應 3min的吸光度變化值ΔAt。
6 結果的表述計算
6.1 結果計算見式（1）。
抑制率（%）=[（ΔA0-ΔAt）/ΔA0]×100…………………………（1）
式中：ΔA0——對照溶液反應 3min吸光度的變化值；
ΔAt——樣品溶液反應 3min吸光度的變化值。
6.2 結果判定
結果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。 當蔬菜樣品提取液對酶的抑制率≥50%時，表示蔬菜中有高劑量有機磷或氨基甲酸酯類農藥存在，樣品為陽性結果。陽性結果的樣品需要重複檢驗 2 次以上。對陽性結果的樣品，可用其它方法進一步確定具體農藥品種和含量。
7 附則
7.1 酶抑制率法技術指標
7.1.1 靈敏度指標：酶抑制率法對部分農藥的檢出限見下表。
酶抑制率法對部分農藥的檢出限
7.1.2 符合率：在檢出的抑制率≥50%的 30 份以上樣品中，經氣相色譜法驗證，陽性結果的符合率應在 80%以上。
8 說明
8.1 蔥、蒜、蘿蔔、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有對酶有影響的植物次生物質，容易產生假陽性。處理這類樣品時，可採取整株（體）蔬菜浸提。對一些含葉綠素較高的蔬菜，也可採取整株（體）蔬菜浸提的方法，減少色素的干擾。
8.2 當溫度條件低於 37℃，酶反應的速度隨之放慢，加入酶液和顯色劑後放置反應的時間應相對延長，延長時間的確定，應以膽鹼酯酶空白對照測試 3min的吸光度變化ΔA0值在 0.3 以上，即可往下操作。注意樣品放置時間應與空白對照溶液放置時間一致才有可比性。膽鹼酯酶空白對照溶液 3min的吸光度變化ΔA0值<0.3 的原因：一是酶的活性不夠，二是溫度太低。
8.3 考慮到酶試劑的有效期很短，最好在實驗前，測試酶的活性，達到要求後才能往下進行。
8.4 也可使用符合上述方法要求的快速檢測儀。
附屬檔案5.火焰光度檢測器（FPD）毛細管氣相色譜法測定
食品、毒餌、飲水、嘔吐物等樣品中的有機磷農藥
1 適用範圍
本方法適用於食品、毒餌、飲水、嘔吐物等樣品中有機磷農藥的應急檢測。
2 原理
樣品中微量有機磷農藥經前處理，定量注入色譜柱，各有機磷農藥在柱上逐一分離，依次在火焰光度檢測器富氫火焰中燃燒，發射出 526nm波長的特徵光。光強度與含磷量成正比，此特徵光通過磷濾光片，由光電倍增管檢測進行定量分析。
3 方法重要參數
3.1 線性範圍：（0.5～10.0）μg/ml（標準溶液）；
3.2 精密度（RSD）：≤10%；
3.3 回收率：70%～110%；
3.4 檢出限：0.5μg/ml；
3.5 干擾：有些有機磷農藥出峰可能重疊，檢測出有機磷農藥時，可更換不同色譜柱或用 GC/MS 法進行確認。
3.6 全程測定時間：30min～60min。
4 試劑和儀器
4.1 試劑和材料
4.1.1 有機磷農藥標準品：分析試劑級。
4.1.2 有機磷農藥標準貯備液（10mg/L）：用丙酮配製單個有機磷農藥標準貯備液。
4.1.3 丙酮、乙酸乙酯，分析純試劑。
4.1.4 高純氣體：氦氣、氫氣、氮氣、空氣。
214.2 主要儀器和設備
4.2.1 氣相色譜儀
火焰光度檢測器
色譜柱：DB-1、DB-5、DB-1701、DB-210，詳見表1。
4.2.1 玻璃器皿：分液漏斗、小瓶、試管、容量瓶。
4.2.3 微量注射器：10μl。
4.2.4 氮吹儀、離心機。
5 操作步驟
5.1 樣品前處理
5.1.1 殘留濃度較高的樣品
a）毒餌
準確稱取約0.02g樣品於2ml帶塞離心管中，加入1ml乙酸乙酯，渦旋振盪溶解（如果不溶,渦旋振盪2min），取此溶液用乙酸乙酯稀釋100倍，待測。
b）盛放毒物容器
取5ml乙酸乙酯加入盛放毒物容器中，振搖1min，提取液轉移入試管中，待測。
5.1.2 固體樣品
準確稱取約0.2g樣品（顆粒大的固體需先研磨碎）於5ml帶塞離心管中,加入2ml乙酸乙酯, 渦旋振盪2min,離心分離，收集上清液於另一5ml帶塞離心管中，重複提取1次，合併有機相, 用無水硫酸鈉脫水，於50℃下用氮吹儀濃縮至乾,加500μl乙酸乙酯，待測。
5.1.3 半固體樣品
準確稱取約1g樣品於10ml帶塞離心管中，加適量無水硫酸鈉，用玻璃棒研磨為粉狀，加5ml乙酸乙酯，渦旋振盪2min,離心分離，收集上清液於另一5ml帶塞離心管中，重複提取1次，合併有機相，用無水硫酸鈉脫水，於50℃下用氮吹儀濃縮至乾,加500μl乙酸乙酯，待測。
5.1.4 液體樣品
準確量取1ml液體樣品放入5ml帶塞離心管中，加入2ml乙酸乙酯,渦旋振盪2min，8000rpm離心2min，用滴管分離上清液，重複提取1次，合併有機相，用無水硫酸鈉脫水，於50℃下用氮吹儀濃縮至乾,加500μl乙酸乙酯，待測。
5.2 分析步驟
5.2.1 儀器調試
根據儀器說明書和表1列出的色譜條件調試儀器；分析開始時，進溶劑空白，保證沒有溶劑干擾。
5.2.2 校準
取標準貯備液逐級稀釋至濃度為（0.50～10.0）μg/ml的混合標準溶液，各取1μl混合有機磷標準溶液，注入氣相色譜儀。以測得的峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標和標準液濃度，繪製標準曲線。每次分析樣品時，至少用5個標準點進行標準曲線，標準曲線需覆蓋分析方法範圍，標準樣品進樣體積與試樣的體積相同，儘可能同時分析。
5.2.3 樣品測定
取1μl試液，注入氣相色譜儀，測定峰面積，外標法定量；保留時間定性（表2數據為不同的有機磷農藥的保留時間參考值）。
5.2.4 計算
a）固體（半固體）樣品
ρ = ρ1×V1/m
式中，
ρ為樣品中有機磷農藥質量濃度，mg/kg；
ρ1為從標準曲線查出的有機磷農藥質量濃度，μg/ml；
V1為試樣定容體積，ml
23m為樣品質量，g
b）液體樣品
ρ = ρ1×V1/V
式中，
ρ為樣品中有機磷農藥質量濃度，mg/L；
ρ1為從標準曲線查出的有機磷農藥質量濃度，μg/ml；
V1為試樣定容體積，ml；
V為取樣體積，ml。
6 質量控制
檢測時，應同時加做空白平行樣品，檢測出有機磷農藥時，可更換不同色譜柱或用 GC/MS 法進行確認。
表 1 推薦的色譜柱和色譜條件*
表 2 有機磷農藥的保留時間
