《循環microRNA-21通過靶基因PTEN參與多發性硬化發病機制的研究》是依託山東大學，由梁兵擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：循環microRNA-21通過靶基因PTEN參與多發性硬化發病機制的研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：梁兵
- 依託單位：山東大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
本項目擬在前期工作和預實驗的基礎上，發現循環miR-21可能通過靶基因PTEN參與了多發性硬化發病的分子機制，因此我們提出假設：即miR-21的表達上調導致PTEN的低表達，低表達的PTEN可導致PI3K和Akt的過度活化，從而使IL-23表達增加，高表達的IL-23可通過誘導、分化Thl7細胞產生IL-17導致MS發病。為此我們擬在EAE動物模型上驗證該機制，同時在病情的不同時間點檢測體液中miR-21的表達，觀察其與MS病情的關係，爭取使循環miR-21能夠作為MS無創診斷和預後的生物標誌物。然後我們擬在闡明miR-21參與MS發病的分子機制後，利用EAE模型對可通過血腦屏障的、以活化免疫細胞為靶向的雙靶向納米材料介導miR-21反義寡核苷酸沉默治療MS，並對其可行性及生物安全性進行初步評估，為MS的基因治療帶來新的希望和突破，也將為尋找MS的分子標誌物和基因治療的新靶點奠定理論基礎。
結題摘要
一、背景： 本項目前期工作發現循環miR-21可能通過靶基因PTEN參與了多發性硬化發病的分子機制，因此我們提出假設：即miR-21的表達上調導致PTEN的低表達，低表達的PTEN可導致 PI3K 和Akt的過度活化，從而使IL-23表達增加，高表達的IL-23可通過誘導、分化Th17細胞產生IL-17導致MS發病。 二、方向和主要內容： 我們擬在EAE動物模型上驗證該機制，同時在病情的不同時間點檢測體液中miR-21的表達，觀察其與MS病情的關係，爭取使循環miR-21能夠作為MS無創診斷和預後的生物標誌物。然後我們擬在闡明miR-21參與MS發病的分子機制後，利用EAE模型對可通過血腦屏障的、以活化免疫細胞為靶向的雙靶向納米材料介導miR-21反義寡核苷酸沉默治療MS，並對其可行性及生物安全性進行初步評估，為MS的基因治療帶來新的希望和突破。 三、重要結果： （1）製備並檢測了多種新型納米材料，發現新型納米材料β-CD-(D3)7對神經母瘤細胞的毒性較小，轉染效果較好。其他多種材料因轉染效率差而未進行進一步檢測。 （2）初步檢測了miR-21在部分MS病人的血液中的表達及相關性； （3）完成了多種非病毒載體介導microRNA轉染炎症相關細胞的體外實驗研究； （4）完成了microRNA-21表達變化對THP-1細胞炎症反應的相關研究。 四、關鍵數據及其科學意義： 1、完成了納米材料β-CD-(D3)7對神經母瘤細胞的毒性及轉染效果的檢測： β-CD-(D3)7和DNA在N/P比為10時就能完全結合。當材料濃度大於50ug/uL時，HEK293細胞活力分別為50%（β-CD-(D3)7）和17%（PAMAM）；SH-SY5Y細胞的活力分別為30%（β-CD-(D3)7）和16%（PAMAM）。在HEK293細胞系中，當N/P比=20時，β-CD-(D3)7的轉染效率為45%，PAMAM為23%；在SH-SY5Y細胞系中，β-CD-(D3)7的轉染效率為19%，PAMAM為7%。β-CD-(D3)7具有很強的DNA負載能力，對神經系統細胞轉染效率高，同時細胞毒性較低，可作為新的神經系統細胞基因載體，套用於下一步的體內實驗。 2、研究了miR-21在神經免疫中對TNF-α細胞因子的調控作用： （1）過表達miR-21的THP-1細胞TNF-α的基因相對表達量和釋放濃
