循環腫瘤細胞中B型肝炎病毒X基因整合與突變的研究

《循環腫瘤細胞中B型肝炎病毒X基因整合與突變的研究》是依託杭州師範大學，由張航擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：循環腫瘤細胞中B型肝炎病毒X基因整合與突變的研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：張航
• 依託單位：杭州師範大學

項目摘要

B型肝炎病毒（Hepatitis B virus, HBV）X 基因（HBx）在肝細胞基因組中的整合和X 蛋白的反式激活作用對於肝癌的發生和發展、轉移有重要意義。同時，循環腫瘤細胞（CTC）是近年來腫瘤轉移、復發領域研究的熱點，大量證據表明，在肝癌患者肝癌切除或肝移植前，已有腫瘤細胞脫落進入血循環系統中，入血的循環腫瘤細胞是導致肝癌術後轉移和復發的重要因素。本研究以HBV陽性的肝癌患者CTC為研究對象，套用Alu-PCR的方法，分析研究CTC中HBx基因的整合及突變情況，從而揭示HBx基因的在肝癌患者細胞中的突變及整合特點。並於細胞水平探討有可能發現的新的HBx基因的生物學功能，比較新的突變性HBx基因與野生型HBx基因促細胞凋亡作用、細胞轉化作用的差異。實驗結果將進一步闡明肝癌發生、轉移的分子機制，為臨床治療提供新的理論基礎及實驗依據，具有重要意義。

結題摘要

在本項目研究中，我們首先在HepG2.2.15細胞中，檢測未整合的HBx基因，及整合的HBx基因的突變情況，結果發現，未整合至染色體的HBx基因，經測序結果與野生型一致。而用Alu-PCR的方法，檢測到在HepG2.2.15細胞中，HBx基因整合至第16號染色體上，並且，整合的HBx基因發生C末端缺失，此後這種突變型基因在24例CTC樣本中，有3例CTC檢出類似的突變型基因。此後，我們分別將野生型及突變型HBx基因克隆至真核表達載體pCMV-Tag2B，穩定轉染人正常肝細胞系L-O2後，發現野生型及突變型HBx基因均可上調細胞中miR-125a-5p的轉錄水平，且突變型HBx基因對於miR-125a-5p的上調更加明顯，同時抑制miR-125a-5p的靶基因TNFAIP3/A20的表達。 在此之上，我們發現無論HBx或是miR-125a的轉染，均可增加L-O2細胞對於TRAIL誘導細胞凋亡的敏感性，這種敏感性的增加與A20蛋白表達的抑制相關，同時，HBx激活caspase-8的水解，並且我們發現caspase-8的K63泛素化水平被HBx蛋白所抑制。以上研究結果均提示，突變型HBx基因、miR-125a及A20均有可能成為HBV感染過程中的關鍵診斷標誌物，並有可能作為HBV感染相關治療的潛在的治療靶點。