《從孤兒G蛋白偶聯受體中篩選蛋白質多肽激素的受體》是依託同濟大學，由郭占雲擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：從孤兒G蛋白偶聯受體中篩選蛋白質多肽激素的受體
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：郭占雲
- 依託單位：同濟大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
蛋白質多肽激素是一類重要的內源信號分子，通過激活靶細胞膜上特定受體發揮功能，已知能激活100多個G蛋白偶聯受體（GPCRs），是一類重要的GPCR內源配基。近年發現了一些新的蛋白質多肽激素，找到它們的受體成為一項重要任務。目前還有100多個孤兒GPCRs，我們推測其中相當一部分可能是蛋白質多肽激素的受體。在本項目中，我們擬從本實驗室最近構建的95個人源孤兒GPCRs中篩選蛋白質多肽激素的受體。首先通過大腸桿菌重組表達及化學肽合成獲得40種以上受體未知的人源蛋白質多肽激素並用螢光探針標記。隨後通過配基誘導受體內吞可視化觀察和G蛋白信號通路報告基因測活兩種篩選方法，逐一測試過表達在HEK293T細胞中的孤兒GPCRs，找出可被激活的受體並進一步確認。該篩選策略有望在蛋白質多肽激素和孤兒GPCRs間架起一座有效溝通的橋樑，預期找到1-2個蛋白質多肽激素的受體，為深入功能研究及藥物開發打下基礎。
結題摘要
G蛋白偶聯受體（GPCRs）是最大的一類細胞膜受體，也是最重要的一類藥物靶點。蛋白質多肽激素是最大的一類信號分子，也是最大的一類GPCRs內源配基。目前，還有100多個GPCRs的內源配基未知，因此它們被稱為孤兒受體；同時，也還有很多蛋白質多肽激素的受體未知，雖然對其生理功能已經有了一定的了解。因此，本項目中我們開展了以下工作，希望從克隆的孤兒GPCRs中篩選蛋白質多肽激素的受體。(1)通過在蛋白質多肽激素的合適位點偶聯或融合NanoLuc螢光素酶，我們開發了新型超靈敏生物發光示蹤劑，用於通過配基-受體結合的方法篩選孤兒GPCRs。(2)利用NanoBRET和NanoBiT技術，我們開發了新型均相配基-受體結合測定體系，用於研究GPCRs與蛋白質多肽激素的作用機制。(3)我們用40多種重組表達或化學合成的蛋白質多肽，通過結合、激活、內吞等多種方法對過表達在人胚腎(HEK)293T細胞上的100多個孤兒GPCRs進行了篩選，發現之前報導的一些配對關係並不能被驗證。(4)通過結合及激活測定，我們證明了肝臟表達抗菌肽LEAP2其實是ghrelin受體GHSR1a的競爭性拮抗劑，而不是之前報導的非競爭性拮抗劑，而且發現LEAP2具有不易從受體解離的特性及加入方式依賴的罕見拮抗模式。(5)研究了本實驗室長期關注的類胰島素/鬆弛素家族多肽與其G蛋白偶聯受體RXFP3和RXFP4相互作用的分子機制，並設計開發了新型激動劑和拮抗劑。本項目相關研究工作目前已發表標註本項目資助的SCI論文19篇，總影響因子約70，累計被引用近百次，該項目已培養畢業博士生、碩士生各4名，形成了一支穩定的研究隊伍，本課題組成為國內外蛋白質多肽激素研究的一支重要力量。
