《常見果蔬中諾如病毒吸附受體的解析及其分布規律》是依託上海套用技術大學，由李茜茜擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：常見果蔬中諾如病毒吸附受體的解析及其分布規律
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：李茜茜
- 依託單位：上海套用技術大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
諾如病毒是非細菌性流行性腹瀉的最主要病原之一，可污染果蔬類農產品，且在加工處理過程中極易導致交叉污染。目前，果蔬中諾如病毒的吸附受體及其分布規律還知之甚少。本項目擬以冰晶核蛋白InaQ作為載體，通過構建InaQ的N末端缺失突變體庫，利用膜定位分析方法，獲得該蛋白的膜結合核心結構域；以該結構域為載體蛋白，以諾如病毒衣殼蛋白（VP1）為乘客蛋白，以大腸桿菌為受體菌，構建VP1全細胞表面展示體系。以展示體系作為諾如病毒的替代物，收集與受體結合的表面展示重組菌，利用雙向電泳和質譜分析等技術，解析並驗證果蔬中諾如病毒吸附受體。同時，在多種常見果蔬樣本中進行諾如病毒吸附受體定位分析，考查該病毒吸附受體在果蔬中的分布規律。本課題的實施將為果蔬類農產品中諾如病毒的檢測方案和污染機制提供理論依據和技術支撐。
結題摘要
人源諾如病毒（human norovirus, hNoV）是非細菌性流行性腹瀉的最主要病原之一。生菜是hNoV吸附及傳播的重要載體之一。了解生菜中hNoV吸附介質的分布規律及組成成分，是闡明生菜吸附病毒及傳播機制首要問題。由於該病毒暫無有效的體外增殖模式，且不易收集觀察，阻礙了其與生菜互作機制的研究。為克服上述技術瓶頸，本項目以冰晶核蛋白InaQ作為載體，通過結構預測和異源表達的跨膜分泌活性結構域分析驗證，獲得該蛋白膜結合核心編碼區為N末端結構域前175個胺基酸（InaQN）。以InaQN為載體蛋白，分別構建了hNoV原型株GI.1型和流行株GII.4型主要衣殼蛋白（VP1）及P結構域大腸桿菌細胞表面展示體系。通過膜定位分析和展示性能評估實驗，結果表明表達的融合蛋白InaQN-VP1（GI.1），InaQN-VP1-P（GI.1），InaQN-VP1（GII.4），InaQN-VP1-P（GII.4）均成功錨定於大腸桿菌細胞表面，並具備與hNoV相同的免疫原性和已知受體血組織抗原（HBGAs）結合能力。在此基礎上，通過雷射共聚焦免疫螢光顯微鏡觀察表面展示重組菌在生菜葉面分布。結果表明，hNoV更易結合老生菜葉，且可分布於生菜葉面、葉脈和氣孔。該分布規律解釋了簡單水洗無法有效清除生菜葉面附著病毒的原因，並能使病毒的檢測更具靶向性。通過生菜葉面/葉脈提取物與表面展示重組菌互作分析，揭示了生菜葉面與病毒結合的介質為類HBGAs物質；其中，多糖在病毒與生菜結合過程中起主要作用，且不同基因型病毒與生菜的結合組分有差異。該研究結果豐富了病毒傳播機制的研究內容，為進一步探究人源諾如病毒與果蔬互作機制提供了理論依據。
