差向顯示PRC

差向顯示PCR 是一種用於檢測由於發育或生理因素、突變或特定基因單純轉染的反應造成基因表達圖譜發生某些變化的特定狀態下,上、下調節基因總數的一種方法。它採用隨機序列引物,以產生CDNA 標記。DDRT-PCR 將隨機引物序列和錨定CDNA 引物結合使用,主要獲得起始於poly(A) 尾並往上游延伸50一600 個核苷酸的片段。

它能用一定量的多對引物,獲得在某種特定細胞中表達的所有mRNA非常完整的圖譜。它包括三個基本步驟和兩個附加步驟:@用一套錨定引物逆轉錄每部分材料;@用一套隨機引物和錨定引物從逆轉錄的每一部分擴增cDNA;3電泳分離產生的擴增片段;@再擴增兩種不同狀態下有差異的片段,並且進行克隆和測序;S用單獨RNA分析技術證實差異表達。利用此法已成功地分離了各種生物狀態中表達差異的基因,如糖尿病、胚胎髮育、腦發育及生物調節因子。

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