具有針對性的SNP分型技術，“巢式PCR-RFLP”基因分型技術，不同於傳統的只能對於有酶切位點的傳統的SNP分型的技術，“巢式PCR-RFLP是針對任意的基因分型技術，使任何位點最終都能進行常規限制性內切酶鑑定；同時該SNP分型技術利用巢式PCR技術，使得多個位點同時進行分析稱為可能。
基本介紹
- 中文名：巢式PCR-RFLP技術
- 屬性：具有針對性的SNP分型技術
- 優勢：所需DNA濃度低
- 該技術：比Taqman技術價格低
技術簡介,技術原理,
技術簡介
新型的基因分型技術(SNP分型)——巢式PCR-RFLP技術
具有針對性的SNP分型技術，“巢式PCR-RFLP”基因分型技術，不同於傳統的只能對於有酶切位點的傳統的SNP分型的技術，“巢式PCR-RFLP是針對任意的基因分型技術，使任何位點最終都能進行常規限制性內切酶鑑定；同時該SNP分型技術利用巢式PCR技術，使得多個位點同時進行分析稱為可能。即使低濃度的DNA也能夠進行快速準確的分型工作。
與現有常規的分型技術相比，其最大的優勢包括：
(一)所需DNA濃度低。1-2ng/uL也能完成檢測工作，而Taqman技術所需的DNA含量至少5ng/uL。
(二)價格低。由於不需要合成螢光探針，使得該技術比Taqman技術價格低，該優勢在對多個位點同時進行分型時更明顯。
技術原理
採用的巢式PCR－RFLP分型技術，其基本原來是利用PCR引物的3’端，對SNP位點附近的鹼基進行人為改造，產生一個常規的限制性內切酶識別序列，如SNP rs1321425（rs1321425－來自NCBI的refSNP資料庫）的C/G，其任何一個鹼基和上下游鹼基無法形成一個可直接被限制性內切酶識別的序列，於是我們對SNP位點前的上游鹼基進行改造，通過對序列的分析和PCR效果的計算，我們將原本四個鹼基AGAT改成CTGC，結合後一個鹼基A以及SNP位點G，形成CTGCAG（PstI）酶切識別位點，經測序和序列對比，改造成功。又比如rs9309462和rs4646642，成功的將2個鹼基，3個鹼基進行成功的改造。
