《尿胞外體在糖尿病腎小管損害早期診斷中的作用研究》是依託山東大學，由孫愛麗擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：尿胞外體在糖尿病腎小管損害早期診斷中的作用研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：孫愛麗
- 依託單位：山東大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
中文摘要：糖尿病腎病往往首先引起腎小管細胞的損傷或者是在引起腎小球病變的同時也引起腎小管細胞的損傷。現已證實胞外體中包含大量與疾病相關的蛋白質。研究亦證實近曲腎小管上皮細胞分泌大量胞外體。因此本研究期望能發現反映糖尿病腎病早期損傷的標誌物。體外研究：主要人近曲腎小管上皮原代培養細胞為模型，在體外分別套用高糖、缺氧、藥物等因素干預，利用獨有的胞外體抗體對不同時間點各組上清液中的胞外體進行蛋白質組學分析，並從中篩選腎小管細胞損傷特異性生物學標誌物，進一步分析胞外體在各種病理因素下的變化及作用，用ELISA法在胞外體上檢測尿調蛋白、E-鈣粘蛋白、單核細胞趨化蛋白-1及其它炎症因子等的含量。臨床研究：收集正常人、糖尿病腎病各期臨床病例共240例，觀察尿胞外體結合及游離尿調蛋白、E-鈣粘蛋白、單核細胞趨化蛋白-1、白介素1B等，並分析之間的相關性及與腎病各期的相關性。
結題摘要
糖尿病腎病是糖尿病常見慢性併發症，嚴重影響患者的生活質量,如何預防和早期治療糖尿病腎病是目前醫學界研究的熱點。臨床研究方面：我們收集臨床資料完整的2型糖尿病腎病患者49例，2型糖尿病無腎病的患者45例，正常人30例，收集血、24小時尿標本,通過超速離心和特異性抗體兩種方法提純胞外體，電鏡驗證了尿中存在胞外體，westen方法檢測胞外體標誌物（TSG101、C D63）,ELISA方法檢測尿胞外體結合尿調蛋白、E-鈣粘蛋白、IL1β、P53、TGF-β1及TNFα等蛋白。我們發現了兩個與糖尿病腎病發生髮展密切相關的指標（Uromodulin和IL-1β）。細胞培養方面：體外培養人近曲腎小管上皮細胞（HKC），分別給予葡萄糖、人血白蛋白、轉化生長因子β刺激。葡萄糖組根據葡萄糖的濃度分 3組：正常糖組（5.5mmol/L葡萄糖）、高糖組（30mmol/L 葡萄糖）、滲透壓對照組（5.5mmol/L 葡萄糖加24.5mmol/L 甘露醇）；白蛋白組分3組（分別為0.1、1.0、10.0ng/ml）；轉化生長因子組依照刺激濃度分3組（分別為0.1、1.0、10.0ng/ml），以上三組均設立空白對照組,觀測時間分別為 4、12、24、48小時。我們已經驗證腎小管上皮細胞培養上清液中存在外泌體，細胞培養不是我們想像的結果，我們再摸索實驗條件，並通過ELISA和westen、PCR檢測外泌體結合尿調蛋白、E-鈣粘蛋白、IL1β、P53、TGF-β1及TNFα等指標。
