小鼠游離脂肪酸(FFA)ELISA試劑盒

小鼠游離脂肪酸(FFA)ELISA試劑盒

小鼠游離脂肪酸(FFA)ELISA試劑盒是用於測定小鼠血清、血漿及相關液體樣本中游離脂肪酸(FFA)含量的試劑盒。

基本信息,實驗原理,試劑盒組成,標本要求,操作步驟,計算,注意事項,保存條件及有效期,

基本信息

小鼠游離脂肪酸(FFA)ELISA試劑盒
檢測範圍: 96T
25μmol/L -800μmol/L

實驗原理

本試劑盒套用雙抗體夾心法測定標本中小鼠游離脂肪酸(FFA)水平。用純化的小鼠游離脂肪酸(FFA)抗體包被微孔板,製成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入游離脂肪酸(FFA),再與HRP標記的游離脂肪酸(FFA)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體複合物,經過徹底洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的游離脂肪酸(FFA)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠游離脂肪酸(FFA)濃度。

試劑盒組成

1
30倍濃縮洗滌液
20ml×1瓶
7
終止液
6ml×1瓶
2
酶標試劑
6ml×1瓶
8
標準品(1600μmol/L)
0.5ml×1瓶
3
酶標包被板
12孔×8條
9
標準品稀釋液
1.5ml×1瓶
4
樣品稀釋液
6ml×1瓶
10
說明書
1份
5
顯色劑A液
6ml×1瓶
11
封板膜
2張
6
顯色劑B液
6ml×1/瓶
12
密封袋
1個

標本要求

1.標本採集後儘早進行提取,提取按相關文獻進行,提取後應儘快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放於-20℃保存,但應避免反覆凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

操作步驟

1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
800μmol/L
5號標準品
150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
400μmol/L
4號標準品
150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
200μmol/L
3號標準品
150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
100μmol/L
2號標準品
150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
50μmol/L
1號標準品
150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其餘各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然後再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加於酶標板孔底部,儘量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板後置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋後備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩乾,每孔加滿洗滌液,靜置30秒後棄去,如此重複5次,拍乾。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震盪混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液後15分鐘以內進行。

計算

以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

注意事項

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘後方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,並經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值小於標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)後再測定,計算時請最後乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月

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