免疫學試劑。小鼠免疫球蛋白（IgE）ELISA試劑盒用於小鼠生物樣品中IgE定量測量的體外酶聯免疫吸附測定（ELISA）。在該測定中，樣品中存在的IgE與吸附到聚苯乙烯微量滴定孔表面的抗IgE抗體反應。通過洗滌除去未結合的蛋白質後，加入與辣根過氧化物酶（HRP）綴合的抗IgE抗體。這些酶標記的抗體與先前結合的IgE形成複合物。在另一洗滌步驟之後，通過加入顯色底物3,3'，5,5'-四甲基聯苯胺（TMB）測定與免疫吸附劑結合的酶。
基本介紹
- 中文名：小鼠免疫球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒
- 外文名：mouse immunoglobulin IgE ELISA kit
- 標本要求：不能檢測含NaN3的樣品
- 操作步驟一：調配標準品的稀釋
- 操作步驟二：加樣
- 操作步驟三：溫育
實驗原理,試劑盒組成,標本要求,操作步驟,
實驗原理
小鼠免疫球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒實驗步驟。
本試劑盒套用雙抗體夾心法測定標本中小鼠免疫球蛋白E(IgE)水平。用純化的小鼠免疫球蛋白E(IgE)抗體包被微孔板，製成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入免疫球蛋白E(IgE)，再與HRP標記的免疫球蛋白E(IgE)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體複合物，經過徹底洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的免疫球蛋白E(IgE)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中小鼠免疫球蛋白E(IgE)濃度。
試劑盒組成
1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
2 | 酶標試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 標準品（240μg/ml） | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 9 | 標準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個 |
標本要求
1．標本採集後儘早進行提取，提取按相關文獻進行，提取後應儘快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放於-20℃保存，但應避免反覆凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
120μg/ml | 5號標準品 | 150μl的原倍，150μl稀釋液 |
60μg/ml | 4號標準品 | 150μl的5號，150μl稀釋液 |
30μg/ml | 3號標準品 | 150μl的4號，150μl稀釋液 |
15μg/ml | 2號標準品 | 150μl的3號，150μl稀釋液 |
7.5μg/ml | 1號標準品 | 150μl的2號，150μl稀釋液 |
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加於酶標板孔底部，儘量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板後置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩乾，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複5次，拍乾。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震盪混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液後15分鐘以內進行。
