《小膠質細胞P2Y6受體與帕金森病發病的相關性研究》是依託上海交通大學，由肖勤擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：小膠質細胞P2Y6受體與帕金森病發病的相關性研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：肖勤
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
免疫細胞表面嘌呤能受體P2Y6的改變已被證明與IL-8的釋放、免疫活性細胞的趨化和吞噬增強及免疫炎症損傷密切相關。我們在帕金森病患者外周血單核細胞中檢測到P2Y6受體mRNA水平增高，並初步證明小膠質細胞P2Y6受體的改變與MIP-2（小鼠中IL-8的同源細胞因子）的產生和分泌有關，提示小膠質細胞中P2Y6受體的異常改變可能和帕金森病的發病有關。在此工作基礎上，我們將擴大樣本量，證實帕金森病患者外周血單核細胞的P2Y6受體水平確有改變；同時通過體內、外實驗觀察P2Y6受體的改變是否與小膠質細胞功能的改變、多巴胺能神經元的損傷相關，從而明確P2Y6受體異常改變在小膠質細胞介導的多巴胺能神經元損傷中所起的作用。課題的開展將為探討P2Y6受體作為帕金森病新生物學標記物和潛在治療靶點的可能性提供理論和實驗依據。
結題摘要
目的 探討脂多糖（LPS）刺激下小膠質細胞表面膜嘌呤能受體P2Y6對小膠質細胞激活、炎症因子表達分泌的影響和可能的作用機制，以及對多巴胺能神經元的影響；觀察帕金森病（PD）患者外周血單核細胞表面P2Y6受體表達以及分泌的IL-8水平，以期揭示P2Y6受體在PD發病中的重要作用，以及作為PD診斷的生物學標記物的可能。方法1，檢測LPS刺激後小膠質細胞P2Y6受體的變化，炎症因子MIP-2、iNOS、COX-2、TNF-α、IL-6的釋放；觀察用SiRNA knockdown P2Y6受體後對小膠質細胞MIP-2、iNOS、COX-2、TNF-α、IL-6表達的影響；用核苷酸降解劑觀察對MIP-2的影響，檢測小膠質細胞條件培養液對多巴胺能神經元存活率以及凋亡水平的影響。UDP作用於小膠質細胞後細胞外信號調節ERK1/2、P38激酶、JNK的變化，以及加入ERK1/2抑制劑後對COX-2、MIP-2表達的影響。2，採用定量PCR檢測PD患者145例、帕金森綜合徵患者16例、健康對照170例的外周血單核細胞P2Y6受體mRNA的表達水平差異。檢測43例PD患者和47例正常對照外周血單核細胞IL-8分泌水平和mRNA表達量的變化。結果1，LPS刺激下，P2Y6受體增高，MIP-2、iNOS、COX-2、TNF-α、IL-6表達水平升高。2，用SiRNA knockdown P2Y6受體後降低LPS誘導的小膠質細胞MIP-2、iNOS、COX-2、TNF-α、IL-6的表達；小膠質細胞條件培養液對多巴胺能神經元的毒性作用減弱，神經元凋亡減少。3，P2Y6受體通過ERK途徑及NF-κB參與小膠質細胞激活及炎症因子產生。4，PD患者外周血單核細胞表面P2Y6受體mRNA水平增高，與PD患者的年齡、病程、疾病嚴重程度、PD臨床分型、藥物治療均不相關，是一個穩定的生物學指標。5， PD患者和正常對照的外周血單核細胞在LPS刺激後IL-8 mRNA和分泌水平均升高，且PD患者在LPS刺激前後的水平均較正常對照組稍高，其增高率更明顯，但尚未達到統計學意義。結論 P2Y6受體通過ERK通路參與LPS誘導的小膠質細胞激活，促進炎症因子釋放，介導神經元損傷。PD患者外周血P2Y6受體水平增高，在LPS刺激後分泌的IL-8水平升高，提示外周血P2Y6受體水平可能作為帕金森病診斷的潛在生物標記。
