《寵物賈第蟲人畜共患基因型傳播與致病的分子特性》是依託華南農業大學，由李國清擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：寵物賈第蟲人畜共患基因型傳播與致病的分子特性
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：李國清
- 依託單位：華南農業大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
十二指腸賈第蟲是一種重要的人畜共患寄生蟲，也是犬貓最常見的腸道原蟲，迄今已鑑定出8種基因型（A-H）,其中A型和B型屬於人畜共患基因型。為了探討寵物賈第蟲人畜共患基因型傳播與致病的分子特性，擬採用賈第蟲糞抗原檢測試劑盒對同一地點犬貓和人的糞樣進行篩查，對所獲的賈第蟲分離株進行多位點保守基因（tpi等）和高變基因（ITS等）的擴增及其遺傳多態性（RFLP、SSCP、SNP）分析，比較犬貓和人的賈第蟲Ａ型和Ｂ型種群遺傳結構的差異，創建新型MLG和MLST分型標準和方法，擬對我國主要城市犬貓賈第蟲進行分子流行病學調查；通過系統比較有無症狀犬貓的賈第蟲分離株多位點基因的遺傳差異，創建賈第蟲的毒力基因型；根據不同基因亞型分離株與宿主細胞互作後蟲體因子（bg、ef-1）的變化及其對細胞凋亡的影響,探明犬貓賈第蟲各基因亞型致病的分子特性。上述研究將為實施賈第蟲的風險評估和防控措施提供技術手段和決策依據。
結題摘要
藍氏賈第蟲（又名十二指腸賈第蟲）是一種重要的人畜共患寄生蟲，也是犬貓最常見的腸道原蟲，迄今已鑑定出8種基因型（A-H）,其中A型和B型屬於人畜共患基因型，C、D型與F型分別為犬、貓特異性基因型。為了探討寵物賈第蟲人畜共患基因型傳播與致病的分子特性，本項目採用飽和硫酸鋅漂浮法對犬貓糞樣進行篩查，對所獲的賈第蟲分離株進行多位點基因的擴增及其序列分析，比較犬貓賈第蟲多種分離株種群遺傳結構的差異，創建新型基因分型和PCR檢測方法，對廣東犬貓賈第蟲進行分子流行病學調查，對賈第蟲A型分離株的3種α-賈第素和延長因子ef-1α基因進行克隆、原核表達和亞細胞定位。通過犬貓賈第蟲tpi、gdh、bg和18S rRNA 的基因擴增及序列分析，發現15株犬源賈第蟲和9株貓源賈第蟲為AI型，表明犬貓賈第蟲對人類健康具有潛在威脅。通過多位點基因分型發現，犬貓賈第蟲基因型存在混合感染情況，表明多位點分型在基因分型與檢測上更為精確。以β-賈第素基因作為遺傳標誌，建立了犬貓賈第蟲常見基因型的HRM快速分型和犬源賈第蟲人畜共患與宿主特異性基因型的PCR-RFLP分型方法，基於賈第蟲IGS序列建立了具有良好特異性和敏感性的PCR檢測方法，基於藍氏賈第蟲(A型)的TPI基因和鉤蟲的ITS序列建立了檢測犬源賈第蟲(A型)和鉤蟲混合感染的多重PCR方法，為賈第蟲的分子檢測、分子分類和分子流行病學調查提供了技術手段。首次對A型賈第蟲賈第素α-18、-12、-13和延伸因子EF-1α進行了原核表達和亞細胞定位，發現賈第素α-18主要分布在滋養體的鞭毛處，賈第素α-12、-13和EF-1α分布在胞漿內，這不僅為其致病機制研究奠定了基礎，而且為抗賈第蟲藥物靶標的設計提供了科學依據。
