實罐滅菌是指將配製好的培養基放入發酵罐或其他裝置中，通入蒸汽將培養基和所用設備加熱至滅菌溫度後維持一定時間，再冷卻到接種溫度，也叫間歇滅菌、分批滅菌。實罐滅菌無需專門的滅菌設備，滅菌效果可靠，對滅菌用蒸汽要求低（0.2~0.3MPa）。但同時，實罐滅菌溫度低、時間長而對培養基成份破壞較大，在工業生產中難以實現自動控制。實罐滅菌是中小型發酵罐常採用的一種培養基滅菌方法。
基本介紹
- 中文名：實罐滅菌
- 外文名：Real tank sterilization
- 別稱：間歇滅菌或分批滅菌
- 特點：無需滅菌設備，滅菌效果可靠
- 滅菌所用蒸汽：0.2~0.3MPa
- 缺點：對培養基成份破壞較大
原理,要點掌握,操作方法,優點,缺點,
原理
在進行培養基滅菌之前，通常先把發酵罐空氣分過濾器滅菌並用空氣吹乾。進料後，開動攪拌以防止沉澱。然後開啟夾套蒸汽閥，緩慢引進蒸汽，使料液升溫至80℃左右後關閉夾套蒸汽閥門。開三路（空氣、出料、取樣）進汽閥，開排汽閥。當溫度升到110℃時，控制進出汽閥門直至121℃（表壓0.1~0.15MPa） ，開始保溫，一般保溫20min。保溫結束後，關閉過濾器排汽閥、進汽閥。關閉夾套下水道閥，開啟冷卻水進回水閥。待罐壓低於過濾器壓力時，開啟空氣進氣閥引入無菌空氣。隨後引入冷卻水，將培養基溫度降至培養溫度。
要點掌握
實罐滅菌時一般應掌握如下幾點：
（1）蒸汽進入夾層或蛇形管預熱時，應同時打開排氣口，充分排出罐內空氣。
（2）滅菌過程進入罐內蒸氣量要大，儘可能採用三路蒸氣直接進內層。
操作方法
首先確認蒸汽發生器的各開關都處於正常狀態，向發酵罐內加入水，將蒸汽發生器打開，然後檢查發酵罐的各個開關是否都處於關閉狀態。清洗罐內，用自來水沖洗，並且取下pH電極，pH電極使用前要進行校正，校正用兩種標準溶液，一種pH為4，另一種pH為6.86，校正方法與一般電極相同，校正完成後插上電極。確認排料口已經關閉，向罐內注入6L的LB培養基，培養基的配方與種子培養時的培養基配方相同，然後旋緊加料口蓋，打開攪拌，攪拌速度為200rpm。打開蒸汽發生器的蒸汽輸出閥門，打開發酵罐的蒸汽通路總閥和排料口的蒸汽閥，排儘管路中殘存的冷凝水，等出料口只有水蒸汽冒出時，就說明冷凝水排盡，此時關閉排料口的蒸汽閥門，打開通入夾套中的蒸汽閥門，與排污閥，控制夾套中的壓力，使其處於1.5MPa到2.0MPa左右，罐內的溫度會迅速上升，等溫度達到95℃時就可以關閉攪拌了，此時罐內的培養基已經沸騰無需攪拌，混合的效果已經很好，同時要開始控制罐頂端的排氣閥，先全開，以排盡罐內的空氣，然後適當關小此閥，使罐內的壓力略大於大氣壓。當溫度達到121℃時，實罐滅菌開始計時，同時控制罐壓和夾套內的壓力，溫度才能維持在121℃。
計時開始十分鐘後，打開空氣過濾器的蒸汽閥門和隔膜閥，對空氣通路滅菌。在維持121℃結束前，校正溶氧電極，設定為亞硫酸鈉，即溶氧為設定為0。計時結束後關閉所有的蒸汽閥門，向夾套中通入自來水，此時排污閥仍需要適當打開，因為罐內培養基會使冷卻水氣化，此時要吹乾空氣過濾器內的濾棉，當罐內的溫度降到95℃時，打開攪拌，轉速設定在200rpm，關閉排污閥和排氣閥，向罐內通入無菌空氣，當罐壓上升後，打開排氣閥。當罐內的溫度下降到40℃時，啟動控溫程式，關閉一個水閥，使水流經控制器後在進入夾套。此時可以校正溶氧電極，設定為空氣，即溶氧設定為100。
優點
1、設備成本低；
2、染菌風險低，連續滅菌過程需要將滅菌發酵液無菌輸送至無菌發酵罐；
3、易於人工控制；
4、易於處理含有高比例固體物質的培養基。
5、滅菌用蒸汽要求低（0.2~0.3MPa）。
缺點
1、滅菌溫度低、時間長而對於培養基的營養成份破壞大；
2、蒸氣用量波動大。
3、工業生產中難以實現自動控制。
