《實時無侵襲示蹤肺纖維化轉基因小鼠的研製》是依託中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院，由李文龍擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：實時無侵襲示蹤肺纖維化轉基因小鼠的研製
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：李文龍
- 依託單位：中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
實驗動物模型在研究肺纖維化發病分子機制和藥物篩選發揮著不可替代的作用，而傳統肺纖維化動物模型有以下缺點: 不能實時動態監測肺纖維化的發生髮展過程；不能精準定量病變程度；需使用大量實驗動物，違背實驗動物倫理福利。活體動物生物光學成像技術和轉基因技術相結合製作的新型人類疾病動物模型能克服傳統模型的缺點。我們擬利用活體動物光學成像技術和轉基因技術研製實時無侵襲示蹤肺纖維化進程的轉基因小鼠。我們前期工作表明在小鼠肺纖維化中成纖維細胞激活蛋白質(FAPα)mRNA水平顯著升高並在成纖維細胞特異表達，結合文獻報導證明FAPα是肺纖維化的疾病標誌物。本項目擬通過分析選擇特異且活性強的FAPα啟動子驅動螢光素酶在小鼠表達，製作能實時無侵襲示蹤肺纖維化的轉基因小鼠。在誘導肺纖維化過程中，通過檢測肺部螢光強度來反映纖維化病變程度。該小鼠的成功研製將為肺纖維化發病分子機制研究和治療藥物篩選提供新的動物模型。
結題摘要
該項目我們利用活體動物光學成像技術和轉基因技術研製實時無侵襲示蹤肺纖維化進程的轉基因小鼠。研究了FAPα基因在小鼠肺纖維化的表達規律，研究表明在小鼠肺纖維化中成纖維細胞激活蛋白質(FAPα)mRNA 水平顯著升高並在成纖維細胞特異表達，證明FAPα是肺纖維化的疾病標誌物。證明轉化生長因子β能促進FAPα的轉錄表達。克隆和分析2000 bp、5000 bp等長度的FAPα5’非翻譯區序列，通過啟動子活性分析和轉化生長因子β的相應程度，我們選用了5000 bp的FAPα啟動子驅動螢光素酶在小鼠表達，將克隆的FAPα啟動子連線入PGL3-Basic質粒，製作能實時無侵襲示蹤肺纖維化的轉基因小鼠。通過顯微注射，我們獲得三隻陽性轉基因小鼠（FAPα-Luc）。對FAPα-Luc轉基因小鼠進行博萊酶素誘導前後不同時間點的活體成像，發現肺部螢光強度能反映纖維化病變程度，並且證明發光的細胞為成纖維細胞。該小鼠將為肺纖維化發病分子機制研究和治療藥物篩選提供新的動物模型。 本項目主要完成的研究內容： 1、研究了FAPα基因在小鼠肺纖維化的表達。 2、研究了小鼠FAPα基因表達調控研究及FAPα啟動子的克隆。 3、 獲得FAPα-luc轉基因小鼠。 4、FAPα-luc轉基因小鼠在肺纖維化時發光情況與肺纖維化程度的密切關聯。 取得的成果 1、Li Wenlong, Yang Leilei, Fan Wei, Chen Yi, Tian Jing, Ma Lanzhi, Liu Bing, Li Yang, Wang Shaoxia, Fu Qiuxia, Chen Zeliang, Zhao Zengming. Fibroblast activation protein-α promoter driven luciferase expression in murine pulmonary fibrosis. Biotechnology Letters. 2015. (revised)（第一作者兼通訊作者） 2、小動物多模態活體成像系統的研發與套用。第八屆中國產學研合作創新成果獎。2014年。本人為主要完成人，排名第四。
