《家蠶BmNPV出芽型病毒囊膜蛋白GP64受體蛋白的分子鑑定》是依託浙江大學，由吳小鋒擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：家蠶BmNPV出芽型病毒囊膜蛋白GP64受體蛋白的分子鑑定
- 依託單位：浙江大學
- 項目負責人：吳小鋒
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
家蠶核型多角體病毒是一類專一性感染家蠶的DNA病毒，是引起家蠶病害的主要病原。BmNPV在感染周期中會出現兩種表型不同但遺傳物質完全相同的病毒形態，即出芽病毒BV和包涵體衍生型病毒ODV。ODV通過經口感染寄主，介導昆蟲個體間的傳播，引發中腸原發感染，而BV負責感染細胞和組織間的水平傳播，由此引起寄主的全身性感染。GP64是BV表面的重要特徵囊膜蛋白之一，目前已經明確在BV感染過程中起關鍵作用, 但至今GP64蛋白的受體沒有被鑑定。通過免疫共沉澱、病毒覆蓋、蛋白質質譜鑑定等技術，鑑定BV GP64感染宿主細胞表面相應受體蛋白，進一步闡明其編碼基因和分子特徵。本研究的結果將為闡明病毒囊膜蛋白與受體的相互作用，病毒囊膜-細胞膜融合的分子機制等提供科學依據，從而明確病毒粒子進入寄主細胞的分子機理。闡明這些科學問題還將有助於揭示桿狀病毒的入侵機制及規律，並為設計抗家蠶病毒入侵的有效藥物提供新思路。
結題摘要
家蠶核型多角體病毒既是產業生產上危害最為嚴重的病原，同時也是研究昆蟲病毒學的良好模式。GP64 是家蠶核型多角體病毒BmNPV出芽型病毒粒子BV的一種主要囊膜融合蛋白，在介導BmNPV感染和水平傳播過程中發揮關鍵作用。本研究旨在探究BV入侵宿主的分子機制，鑑定與BV結合的細胞表面蛋白，以及篩選宿主細胞中的GP64互作蛋白，從分子水平闡明桿狀病毒BV入侵宿主以及GP64與宿主互作的分子機制。主要結論如下：1、闡明了BV病毒粒子入侵宿主細胞的機制。用抑制劑處理、siRNA干擾和流式細胞實驗闡明了BV入侵宿主細胞依賴於內吞泡酸化、格線蛋白和動力蛋白，以及Rab5和Rab7的調控，進一步通過電鏡觀察BV入侵宿主細胞的早期過程，證明了格線蛋白在此過程中發揮重要功能。2、篩選了與BV結合的宿主表面蛋白。利用病毒覆蓋蛋白結合實驗，分離並純化BV病毒粒子以及BmN細胞表面蛋白，利用GP64抗體檢測到3個明顯蛋白條帶，表明細胞表面存在與病毒相互作用的蛋白。進一步通過質譜分析從3個陽性分離膠條中共鑑定到158種蛋白。利用生物信息學技術從中篩選到12個可能與BV結合的宿主細胞膜蛋白受體。3、進一步利用酵母雙雜交和CoIP技術鑑定了GP64與宿主的互作蛋白。構建了家蠶BmN細胞酵母文庫，以GP64作為誘餌蛋白進行酵母文庫雜交分析，共篩選到8個與GP64結合的候選蛋白，分別為E3泛素連線酶SINA-like10、RAN結合蛋白、磷酸核糖醯氨基咪唑羧化酶、卵裂和多腺苷化特異性因子5、Abrupt-like蛋白、NADH泛醌氧化還原酶，以及兩個未知蛋白LOC101738779和scaf49 2190774–2191531 (-)。進一步證明了SINAL10與GP64強烈互作且在細胞內共定位。根據病毒覆蓋、酵母雙雜交和COIP等試驗證明Actin,TCTP和SINAL10是GP64的主要受體。
