《家蠶BmNPV中腸原發感染受體蛋白的分子鑑定》是依託浙江大學，由吳小鋒擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：家蠶BmNPV中腸原發感染受體蛋白的分子鑑定
- 依託單位：浙江大學
- 項目負責人：吳小鋒
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
家蠶核型多角體病毒（Bombyx mori nucleopolyhedrovirus, BmNPV）是一類專一性感染家蠶的DNA病毒，病毒粒子借病毒囊膜上的經口感染因子與中腸柱狀上皮細胞表面的特異性受體相互作用，使病毒核衣殼進入中腸上皮細胞，啟動原發感染。但至今這一特異性蛋白受體尚未得到鑑定。通過重組病毒的構建和感染因子的體外表達、蛋白質互作、質譜鑑定、轉基因家蠶、定點突變等分子生化技術，分析和鑑定BmNPV在消化道原發感染過程中的特異性受體，並找出關鍵經口感染因子與受體互作的結構基礎。本項目的結果將闡明病毒囊膜蛋白與受體的相互作用，並為病毒囊膜-細胞膜融合的分子機制等提供科學依據，從而明確病毒粒子進入中腸上皮細胞的分子機理。闡明這些科學問題還將有助於揭示桿狀病毒的入侵機制及規律，並為設計抗家蠶BmNPV病毒入侵的有效藥物提供新思路，同時也為有效控制農業害蟲提供參考策略。
結題摘要
家蠶核型多角體病毒BmNPV是家蠶的主要病原，給蠶絲業造成嚴重危害。該病毒借病毒囊膜上的經口感染因子與中腸柱狀上皮細胞表面的特異性受體相結合，使病毒核衣殼進入中腸上皮細胞，啟動原發感染。但至今寄主特異性蛋白受體尚未得到鑑定。本研究通過重組病毒的構建和感染因子的體外表達、蛋白質互作、質譜鑑定等分子生化技術，分析和鑑定BmNPV在消化道原發感染過程中的特異性受體。構建了家蠶原發感染器官-中腸的cDNA文庫和酵母文庫，並利用這些ODV囊膜特有的經口感染因子為誘餌，特別是對BmNPV 原發感染中起關鍵作用的p74蛋白，利用GST Pull Down、酵母雙雜交以及病毒覆蓋蛋白技術等蛋白質相互作用技術，鑑定了中腸上皮細胞中6個能夠與PIFs發生相互作用的重要蛋白靶標分子，分別為cysteine and histidine-rich protein 1-B，U3 small ribonucleoprotein protein IMP3,eukaryotic translation initiation factor 1A, JAB-MPN domain protein, Actin(cytoplasmic A3)和35kDa protease。進一步鑑定35KDa蛋白與p74強烈互作，是BmNPV在中腸原發感染過程中的重要靶標蛋白。本研究還對經口感染因子相關蛋白進行了研究，發現和鑑定了新的經口感染因子，闡明了經口感染因子間的蛋白互作模式；構建了病毒衣殼蛋白VP39融合Mcherry的螢光標記重組病毒, 為深入追蹤病毒感染進程以及感染機理提供了一個重要工具。本研究的結果為闡明病毒囊與細胞膜融合的分子機制等提供了科學參考，將有助於揭示桿狀病毒的入侵機制及規律，並為設計抗家蠶BmNPV病毒入侵的有效藥物提供新思路，同時也為有效控制農業害蟲提供參考策略。
