家蠶傳染性軟化病病毒翻譯機制及侵染機制的研究

《家蠶傳染性軟化病病毒翻譯機制及侵染機制的研究》是依託浙江大學，由魯興萌擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：家蠶傳染性軟化病病毒翻譯機制及侵染機制的研究
• 依託單位：浙江大學
• 項目負責人：魯興萌
• 項目類別：面上項目

項目摘要

引起家蠶傳染性軟化病的病原為家蠶傳染性軟化病病毒（Bombyx mori infectious flacherie virus，BmIFV），病毒的翻譯和複製機制無疑是其侵染宿主機制解明的重要方面。正義小RNA病毒5′端內部核糖體進入位點功能的研究和病毒反向遺傳學模型在複製機制研究中的套用正在得到更多學者的關注。本項目將利用桿狀病毒表達系統及SP6體外反轉錄系統，研究BmIFV 5′端內部核糖體進入位點的功能，通過對病毒基因組相關結構及其與宿主因子的相互作用關係的研究，解明BmIFV的翻譯起始過程。並在此基礎上，探索該病毒的反向遺傳學研究體系，研究病毒複製過程中主要相關病毒基因及功能。通過本研究解明BmIFV侵染細胞後，在細胞質中與翻譯起始等因子的互作翻譯機制，以及病毒部分功能基因在病毒翻譯和複製過程中的功能，初步闡明BmIFV侵染家蠶的機制，為家蠶病毒性軟化病的藥物防控提供參考依據。

結題摘要

家蠶軟化病是一類嚴重影響蠶業生產的病害，家蠶傳染性軟化病病毒（Bombyx mori infectious flacherie virus，BmIFV）為導致該病害的重要病原之一。為探討BmIFV的翻譯和複製機制，本研究運用生物信息學分析了BmIFV 結構蛋白前的 5′ 端序列，發現其可能具有內部核糖體進入位點（IRES）功能；利用含有雙螢光蛋白基因和雙螢光素酶基因的兩類重組桿狀病毒表達系統，驗證了不同長度的 BmIFV 5′ 端序列的 IRES 功能，結果顯示其不具有種屬和組織特異性。說明BmIFV特異性的侵染家蠶中腸組織杯狀細胞的特性與其翻譯起始的特性無關，可能與其侵染受體的特異性或複製的特異性有關。研究進而利用RNA Pull-down技術分析了BmIFV 5′端與家蠶中腸蛋白的互作，並結合蛋白質組質譜分析發現了多個BmIFV翻譯相關蛋白（16種核糖體亞基、3種真核翻譯起始因子、1種延伸因子和6種潛在的IRES順式作用因子）、細胞骨架和膜相關蛋白以及代謝酶等蛋白，進一步的生物信息學和代謝通路分析發現BmIFV的5′端序列在病毒的翻譯和複製中具有重要作用。依據對其中的家蠶La蛋白與病毒基因組之間的相互作用分析，推測La蛋白不僅參與病毒的翻譯，還參與病毒的複製過程。這些研究結果的發現有利於揭示病毒在宿主細胞內的翻譯和複製機制，同時對通過宿主調控來防治該病毒提供參考依據。