孤兒核受體Nur77影響子宮內膜異位症胚胎植入的機制研究

《孤兒核受體Nur77影響子宮內膜異位症胚胎植入的機制研究》是依託南京大學，由顏桂軍擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：孤兒核受體Nur77影響子宮內膜異位症胚胎植入的機制研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：顏桂軍
• 依託單位：南京大學

項目摘要

子宮內膜異位症(EMT)是育齡婦女不孕的主要原因之一。已報導，轉錄因子HOXA10和FOXO1A是胚胎著床的關鍵分子，但對其調控機制不清。我們發現在胚胎種植視窗期，EMT 患者子宮內膜中轉錄因子Nur77和蛋白激酶MST1表達均明顯下降；免疫共沉澱證實MST1與Nur77能相互結合，且MST1的氨基端催化結構域介導了Nur77與MST1間的相互作用與Nur77轉錄激活的調控。採用 CHIP-PCR結合基因晶片我們還發現Nur77直接結合於HOXA10與FOXO1A的啟動子區。推測MST1與Nur77的相互作用調控HOXA10和FOXO1A影響著床。因此，本研究將首先確認Nur77參與HOXA10和FOXO1A調控的可靠證據；從蛋白質相互作用角度探討MST1與Nur77相互作用調控HOXA10和FOXO1A的分子機制；進而評價其在導致子宮內膜異位症不孕患者胚胎植入障礙中的作用和臨床意義。

結題摘要

子宮內膜容受性缺陷和子宮內膜蛻膜變不完全致使子宮內膜異位症與腺肌症不孕患者胚胎著床失敗的重要原因，但機制不明。我們發現孤兒核受體Nur77在人胎盤早期蛻膜組織與小鼠胚胎圍種植期子宮組織中的表達量均明顯增加，且Nur77基因敲除小鼠生殖力下降；進一步研究發現Nur77直接與FOXO1A基因啟動子區NBRE反應元件結合轉錄FOXO1A的表達參與調控人子宮內膜間質細胞蛻膜化標誌蛋白dPRL 和IGFBP-1的表達及細胞骨架的重構。臨床研究發現腺肌症不孕患者與他莫西芬誘導腺肌症小鼠的子宮內膜組織中Nur77和FOXO1A的表達較正常內膜中明顯降低，且腺肌症不孕患者間質細胞分泌PRL和IGFBP-1的能力明顯低於正常間質細胞，但當把患者間質細胞NR4A的表達量提高后，明顯改善細胞PRL和IGFBP-1的分泌能力。這些研究結果闡明了腺肌症不孕患者胚胎種植失敗的分子機制。 通過酵母雙雜交篩選和免疫共沉澱實驗證實MST1蛋白激酶結構域與Nur77的DNA結合功能域和LBD功能域直接結合，並明顯促進Nur77對下游靶基因LIF的轉錄與STAT3的磷酸化；胚胎粘附實驗證實MST1和Nur77均可以濃度依賴的方式顯著促進BEWO細胞球與子宮內膜Ishikawa 的粘附，且MST1可協同Nur77促進BEWO細胞球與子宮內膜Ishikawa 間的粘附；當給予LIF抗體進行功能封閉後，MST1和Nur77促進BEWO細胞球與子宮內膜Ishikawa 間的粘附作用被明顯削弱。這些結果初步闡明MST1磷酸化Nur77調節胚胎粘附的分子機制。 小鼠卵巢切除體外蛻膜化誘導模型研究表明小鼠子宮給予高表達Nur77 LBD/DBD腺病毒後，明顯抑制蛻膜化的發生與胚胎的植入。免疫共沉澱分析亦發現Nur77 LBD/DBD介導了Nur77與FOXO1A和蛋白水解酶CAPN7的相互結合，並調節Nur77蛋白的穩定性與轉錄活性。轉錄因子KLF12直接給合於Nur77基因啟動子區參與Nur77的轉錄調控。臨床反覆種植失敗患者子宮內膜組織檢測亦發現MST1、CAPN7、KLF12、FOXO1A與Nur77的表達異常。這些研究分子間的相互作用研究的深入將有望闡明臨床反覆種植失敗病人胚胎種植失敗的分子機制。