《孕酮激素誘發斑馬魚精原細胞增殖分化的機理研究》是依託廈門大學，由陳仕璽擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：孕酮激素誘發斑馬魚精原細胞增殖分化的機理研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：陳仕璽
- 依託單位：廈門大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
近年來，已報導的和我們前期開展的研究結果初步表明，魚類特有的孕酮激素- - 17α,20β-雙羥孕酮（DHP）參與了精原細胞增殖分化過程的調控。同時，套用斑馬魚開展的研究已經明確，孕酮激素核受體（nPR）在下丘腦視前區以及精巢內多種細胞上均有表達。為了進一步闡明孕酮激素誘發斑馬魚精原細胞增殖分化的機理，本項目擬在前期研究工作的基礎上，開展以下研究內容：（1）套用活體暴露的方法，研究DHP是否參與下丘腦-垂體系統中生殖神經內分泌激素的調控；（2）套用以A型精原細胞為主的精巢進行體外培養實驗，研究DHP對精原細胞增殖分化的作用；（3）套用螢光激活細胞分選法從轉基因斑馬魚精巢中分離出精原細胞和支持細胞,再結合抑制性消減雜交技術和蛋白質組學技術，研究DHP對精原細胞和支持細胞基因表達的調控。研究結果不僅可以豐富魚類生殖內分泌調控研究的基礎理論，也可為今後我國魚類人工繁殖技術的完善提供科學依據。
結題摘要
近年來，套用斑馬魚開展的研究已經明確，孕酮激素核受體（Pgr）在下丘腦視前區以及精巢內多種細胞上均有表達。為了進一步闡明孕酮激素在雄性斑馬魚生殖過程中的作用，本項目擬在前期研究工作的基礎上，開展以下研究內容：（1）研究DHP是否參與下丘腦-垂體系統中生殖神經內分泌激素的調控；（2）套用精巢進行體外培養實驗，研究DHP對支持細胞基因表達的調控.主要研究結果如下： 1. 本文採用Golden TALEN技術，成功構建了孕酮核受體基因敲除家系（Pgr-/-）。Pgr-/-的孕酮核受體（Pgr）DNA序列缺少7個鹼基，胺基酸編碼出現移碼突變，蛋白質電泳技術未檢測到蛋白表達。組織學顯示，Pgr-/-雄魚精巢組織中成熟精子量少於野生型雄魚。 2. 野生型雄魚垂體中促性腺激素β亞基基因（fshb和lhb）表達呈現周日變化趨勢，高峰表為06:00。該時間點的Pgr-/-雄魚垂體中fshb和lhb表達量則顯著低於同時間點的野生型雄魚。 3. 野生型雄魚活體暴露於DHP水溶液後，垂體中fshb和lhb 表達量隨DHP暴露濃度的增加和暴露時間的延長均出現上升趨勢；而暴露於DHP+ RU486（DHP核受體拮抗劑）的水溶液後，垂體中fshb和lhb 表達量出現隨RU486暴露濃度的增加而降低的趨勢。 4. 野生型雄魚和Pgr-/-雄魚活體分別暴露於DHP水溶液中24h後，Pgr-/-雄魚垂體中fshb和lhb表達量顯著低於野生型。垂體組織離體暴露於DHP後，Pgr-/-雄魚垂體中的lhb表達量與野生型雄魚比較無顯著性差異，但fshb表達量顯著低於野生雄魚。螢光原位共雜交技術顯示，Pgr與fshb共同表達在相同的細胞中，而Pgr與lhb表達在不同的細胞中。 5.野生型雄魚腦中th2和垂體中drd2a和drd2b 表達量出現周日變化。野生型雄魚和Pgr-/-雄魚活體暴露於DHP水溶液後，腦中th2表達量和垂體中drd2a和drd2b表達量均顯著低於Pgr-/-雄魚。垂體組織離體暴露於DHP後，Pgr-/-雄魚垂體中drd2a和drd2b表達量顯著低於敲除型雄魚。 6. 野生型雄魚精巢組織離體暴露於DHP後，RNA-seq測序結果顯示，DHP處理組精巢組織中ifi44表達量極顯著升高。原位雜交技術顯示，ifi44在精巢組織的間質細胞和支持細胞中均有表達，且主要在間質細胞中表達。
