《子宮頸癌中HPV E6對hTERT基因調控的研究》是依託北京大學，由趙超擔任負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：子宮頸癌中HPV E6對hTERT基因調控的研究
- 項目負責人：趙超
- 依託單位：北京大學
- 項目類別：青年科學基金項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤之一,高危型人乳頭瘤病毒（HPV）感染已被確定是宮頸癌的致病因素。人端粒酶在宮頸癌中活性增強，主要是由於HPV16、18 E6上調了人端粒酶逆轉錄酶(hTERT)水平，但E6如何調控hTERT基因尚不明確。本研究目的：探討HPV E6基因如何通過DNA甲基化和組蛋白修飾來調控hTERT表達、從而促進端粒酶活性、導致宮頸上皮細胞惡變的機制。主要內容：①進一步明確宮頸癌細胞中hTERT基因啟動子甲基化水平和組蛋白修飾，確定關鍵性CpG位點；②通過siRNA干擾HPV陽性的宮頸癌細胞系中的E6基因，同時干擾永生化的人宮頸上皮細胞中的E6基因-再將E6轉染入此細胞中，檢測干擾/轉染前後hTERT表達及其啟動子DNA甲基化和組蛋白修飾的調控改變、以及細胞生物學行為變化。以期揭示E6通過調控hTERT基因致癌的機制，為阻斷宮頸癌的發生提供理論基礎。
結題摘要
在hTERT啟動子上游和中游區域（-624至-200bp）均呈甲基化，但轉錄起始點附近（-156～+162bp）為低甲基化狀態。siRNA干擾E6基因後，hTERT mRNA水平顯著均顯著下降（大於70%,48小時內）；而P53和P21蛋白水平則明顯升高。Caski和Siha細胞系hTERT啟動子關鍵性CpG位點甲基化水平在siRNA干擾後升高，而Hela則無明顯變化。人宮頸癌細胞Hela、Siha、caski中均能分離出SP細胞，其所占比例分別為1.07±0.32%、0.83±0.76%和0.4±0.1% 。對Hela細胞分選出的SP和non-SP細胞生物學特性研究結果：①表面標記物檢測顯示：Oct3/4、CD133及乳腺癌耐藥蛋白（BCRP）在SP細胞中表達明顯高於non-SP細胞②隨著SP與non-SP細胞注射劑量的減少，NOD/SCID鼠致瘤率下降，致瘤潛伏期明顯延長，並且形成的瘤體體積逐漸減小，但是在SP與non-SP細胞之間比較致瘤潛伏期、致瘤率及瘤體體積沒有顯著差異性；③組蛋白去乙醯化酶抑制劑（曲古黴素，TSA）對SP細胞的抑制作用明顯高於non-SP細胞及未分選的Hela細胞；④SP細胞在射線照射後，其較non-SP和Hela細胞更高。基因晶片的檢測結果顯示: 61個miRNA和2767個mRNA在Ect1/E6E7與Siha細胞系之間有差異表達,其中34個miRNA和1138個mRNA在在宮頸癌細胞系中上調，27個miRNA和1629個mRNA在宮頸癌細胞系中下調。關聯後的miRNA-gene-Network調控網路圖結果顯示let-7家族，miR-200家族、miR-15a、miR-23b、miR-34a、miR-155、miR-424在網路調控中處於核心位點，這些核心位點的miRNA在HPV介導的惡性轉化中可能發揮著重要的調控作用。宮頸癌組hTERT mRNA陽性率明顯高於CIN組和正常宮頸組。與hTERT mRNA檢測結果相比較，宮頸癌組和CIN組中HPV E6基因均為陽性，對比TERT陽性者和TERT陰性者的HPV E6基因相對表達量，結果無顯著差異。
