《套用SP-D基因增強型組織工程管改良Bricker術式的相關研究》是依託武漢大學，由熊雲鶴擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：套用SP-D基因增強型組織工程管改良Bricker術式的相關研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：熊雲鶴
- 依託單位：武漢大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
迴腸膀胱（Bricker）術需截取患者自身健康迴腸用作尿液流出通道，破壞腸道導致併發症發生率極高。申請者構建組織工程管替代術中所需迴腸，對該術式進行改良，已通過動物實驗證實可行。但組織工程管植入後存在繼發感染、難存活等問題，限制了進一步臨床套用。有研究發現天然免疫識別分子SP-D的基因多態性與尿路感染存在著密切聯繫，SP-D作為抗感染的天然免疫屏障發揮著重要作用。本研究擬通過將轉染SP-D基因的脂肪幹細胞（ADSCs）與ePTFE支架材料構建組織工程複合物，代替Bricker術中需要的迴腸；採用PCR、Western-Blot等方法檢測SP-D基因和產物的表達情況，通過細菌凝集試驗、體外抑菌圈試驗等檢測基因增強型ADSCs的抗感染能力，不同時間節點取材行HE、IHC等檢測複合物植入後上皮細胞生長情況，探討基因增強型組織工程管改良Bricker術的效果，為進一步臨床套用奠定基礎。
結題摘要
膀胱癌或其他疾病導致膀胱切除後需行尿流改道術，其中以迴腸膀胱（Bricker）術為代表的經典術式均需截取患者自身健康消化道用作尿液流出通道，導致消化道併發症及感染相關發生率極高。本研究通過體外構建人工組織工程管替代術中所需迴腸改良該術式流程，以期減少甚至避免相關併發症。本研究首先完成了脂肪幹細胞（ADSCs）的原代分離和純化，在體外擴增後對相關分子表面標記進行了鑑定，獲得的ADSCs行流式細胞儀檢測細胞表面標誌，鑑定所分離的原代細胞為脂肪幹細胞。構建條件培養基，在體外對脂肪幹細胞進行誘導分化，形成具備表達尿路上皮細胞特異性蛋白的分化後細胞，使組織工程管能夠耐受尿液通過。UP1a在尿路上皮細胞中高表達，而在脂肪幹細胞中無表達，在條件培養基誘導分化培養2周后可以檢測到UP1a蛋白的表達，但弱於尿路上皮細胞。表明部分細胞在條件培養基誘導下已經分化為具有尿路上皮細胞特徵的細胞，但仍有部分細胞未發生變化。PCR進一步檢測UP1a和CK-18基因在尿路上皮細胞中呈高表達，而脂肪幹細胞無表達，誘導分化後細胞中存在兩種基因的表達，但強度均弱於尿路上皮細胞。在體外與膨體聚四氟乙烯（ePTFEet）支架材料構建組織工程複合物後，3天后掃描電鏡檢測細胞已經粘附生長，5天后可見細胞遍布支架表面。細胞-支架複合物體外培養7天后行HE染色見細胞均勻排布，生長狀態良好，證明誘導分化後細胞仍具有持續分裂能力，能夠形成緻密表面構成防治尿液滲透的防護層。植入動物體內進行網膜包裹，利用大網膜的天然孵育能力使組織工程複合物在動物體內快速形成血管化維持細胞活力。Bricker術後2周行靜脈尿路造影顯示管狀組織工程化移植物引流通暢，雙側上尿路顯影清晰，各腎盂、腎盞未見積水，輸尿管中尿液流出通暢，無明顯狹窄或感染，證實該方法改良Bricker術式短期可行，長期效果仍有待進一步研究驗證。
