《大黃魚炎症疾病與巨噬細胞移動抑制因子（MIF）關係的研究》是依託廈門大學，由蘇永全擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：大黃魚炎症疾病與巨噬細胞移動抑制因子(MIF)關係的研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：蘇永全
- 依託單位：廈門大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
大黃魚是我國海水網箱養殖單一品種產量最大的魚類，也是我國8種最具優勢出口水產品之一。由於寄生蟲和細菌等病原誘發的炎症疾病，不僅給大黃魚養殖業帶來了巨大損失，也嚴重污染了環境。尋找替代抗生素治療技術與方法，是我國水產養殖業迫切需要解決的關鍵科技問題。拮抗細胞因子的分子治療已成為人類控制疾病的研究熱點，而巨噬細胞移動抑制因子（MIF）是集細胞因子、神經內分泌激素和酶多種效能的炎症調節因子，已成為高等動物重症炎症疾病分子治療的優良靶標。本項目擬研究大黃魚MIF克隆與表達、生物學活性與免疫功能，揭示魚類MIF與炎症疾病關係，闡明MIF調節大黃魚炎症免疫反應的分子機制；利用大黃魚MIF抗體展開拮抗MIF方式治療重症炎症疾病的探索，闡明魚類炎症疾病拮抗MIF方式分子治療機制，為開展以MIF為靶標的魚類炎症疾病的分子治療方法提供理論依據，為我國水產養殖病害非抗生素防治提出新的途徑。
結題摘要
本項目首次在海洋魚類中系統地研究MIF結構與功能，探討與MIF具有拮抗作用的IFNG因子拮抗功能，初步闡明魚類炎症疾病拮抗MIF的分子治療機制。主要結果如下： (1)克隆了大黃魚MIF(LycMIF)基因，發現LycMIF無論在結構上還是進化水平上都高度保守，含有典型的硫醇蛋白氧化還原酶催化活性所需的CALC結構。 (2)重組LycMIF並在大腸桿菌表達，獲得純度達90%的14.5kDa融合蛋白。製備出2種能與MIF抗原高度結合的多克隆抗體(效價達1∶810000)。生物學活性測定表明重組LycMIF能加速胰島素還原反應，但該反應受pH和GSH濃度影響較大。 (3)研究了炎症疾病發展過程中LycMIF的mRNA和蛋白的組織分布與時空變化，分析了炎症疾病與MIF的關係：①QRT-PCR和免疫組化等表明，LycMIF基因和蛋白在所測組織中呈組成性表達，MIF蛋白的陽性信號主要定位於細胞質。②結合攻毒實驗開展了LycMIF與多種炎症病的關係：免疫組化分析表明，患溶藻弧菌潰瘍病黃魚的肝、頭腎和腸中MIF蛋白表達量明顯高於對照組。ELISA檢測表明，感染刺激隱核蟲病大黃魚與健康魚相比，細胞質MIF濃度有顯著升高。 (4)MIF及IFNG對巨噬細胞起著抑制與激活雙重作用。LycMIF功能初步拮抗分析，發現MIF重組蛋白能激活巨噬細胞產生NO，而IFNG則能激活頭腎細胞的呼吸爆發。對於提高大黃魚免疫系統的防禦能力具有重要作用。 (5)首次探討了海洋魚類大黃魚等的MIF與炎症疾病發生的關係。免疫組化分析結果表明，經弧菌感染的大黃魚，MIF蛋白肝、腎、脾、性腺、腸道和腦組織中均可表達；用拮抗MIF的IFNG蛋白注射大黃魚，發現IRF-1，MHC I重鏈，β-2-微球蛋白，補體系統的B因子和補體2的mRNA表達都有不同程度的上調。 (6)以V.harveyi感染大黃魚(12cm)，再注射MIF抗體並統計死亡率，實驗大黃魚死亡率明顯減少，但不同批次拮抗實驗差異較大，統計學上尚未達到顯著的效果，可能依靠單一拮抗MIF法尚不足以解決複雜的炎症疾病難題。
