大黃對幼齡大鼠膽汁淤積過程中FXR通路的作用機制研究

《大黃對幼齡大鼠膽汁淤積過程中FXR通路的作用機制研究》是依託華中科技大學，由熊小麗擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：大黃對幼齡大鼠膽汁淤積過程中FXR通路的作用機制研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：熊小麗
• 依託單位：華中科技大學

中文摘要

嬰兒膽汁淤積性疾病嚴重影響嬰兒健康。然而，目前臨床針對膽汁淤積的有效藥物不多且療效有限。我們前期實驗發現大黃能通過抑制炎性介質，抗氧化，改善肝臟循環，減少損傷信號，控制中性粒細胞浸潤來達到緩解膽汁淤積性肝損傷的作用。近期發現核因子FXR在膽汁淤積中起樞紐作用。本課題擬從細胞和動物兩個層面來探討大黃對核因子FXR的干預機制。在細胞模型下，分別採用短髮夾RNA干擾技術和FXR抑制劑下調FXR表達，使用大黃素干預細胞，檢測FXR及下游分子的變化，並與熊去氧膽酸、地塞米松對比，明確FXR在常規表達，不表達情況下大黃素分別所起的作用；並進一步在動物實驗中明確大黃及大黃素對FXR分子常規表達，不表達的情況下所起的作用，明確大黃治療膽汁淤積的作用機制，為找到臨床治療嬰兒膽汁淤積的新方法做出有意義的探索。

結題摘要

項目的背景：嬰兒膽汁淤積的發病率為出生嬰兒1/2500。目前治療的可選藥物有限，熊去氧膽酸(UDCA)成為大家公認的治療嬰兒肝內膽汁淤積的有效藥物，能夠緩解一些膽汁淤積患者的臨床症狀，但是約有三分之一的膽汁淤積患者對UDCA無效，這部分患者將面臨著膽汁淤積肝纖維化、肝硬化、肝功能衰竭需要肝移植的嚴重後果。激素類藥物由於其副作用限制其在臨床的長期使用。研製出適用於嬰幼兒的膽汁淤積的藥物顯得尤為迫切。課題組前期的實驗研究發現大黃的單體大黃素能抑制炎性介質、抗氧化、改善肝臟循環，減少損傷信號，控制中性粒細胞浸潤來達到緩解膽汁淤積損傷作用，新近發現法尼醇X受體(FXR)在膽汁淤積中起樞紐作用。主要研究內容：本課題以“FXR為研究的靶點”，從動物和細胞層面研究大黃及其單體大黃素對FXR的干預機制。從細胞層面，採用人胚胎肝細胞L02分子正常表達、低表達（FXR抑制劑孕二烯二酮（Guggulsterones）抑制或siRNA干擾）及過表達（FXR激動劑GW4064或慢病毒上調干預）情況下，檢測FXR及下游相關分子的基因表達，並且與熊去氧膽酸或者地塞米松對照比較。從動物層面，首先建立幼齡大鼠肝內膽汁淤積模型，採用大黃及大黃素分別干預，檢測肝功能等生化指標、觀察其病理改變、檢測FXR及下游相關分子的基因表達。重要結果及關鍵數據：研究結果明1、人胚胎肝細胞L02細胞上均存在FXR及下游的相關分子的表達。2、大黃素對人胚胎肝細胞L02細胞在正常表達、低表達及過表達情況下均對FXR及下游相關分子有促進作用。3、α- 異硫氰酸萘酯(ANIT)成功建立幼齡大鼠膽汁淤積動物模型。4、造模後48h膽汁淤積的模型最重，最具有代表性。5大黃及大黃素均從生化和病理上緩解ANIT誘導的肝內膽汁淤積，且優於熊去氧膽酸及地塞米松，存在劑量相關。6大黃及其大黃素均有上調幼齡大鼠肝臟FXR受體及下游分子基因的表達。科學意義：本研究揭示了大黃及大黃素治療治療膽汁淤積的FXR通路的作用機制，為找到臨床治療嬰兒膽汁淤積的新方法做出有意義的探索，促進其臨床套用。