《多肽HBSP保護豬移植腎的信號通路的動態網路研究》是依託復旦大學，由戎瑞明擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：多肽HBSP保護豬移植腎的信號通路的動態網路研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：戎瑞明
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
HBSP(helix B surface peptide)是我們自主合成並已申請專利的腎臟保護性多肽，前期研究已證實其在腎臟缺血再灌注損傷中具有顯著的抗凋亡和抗炎症的保護作用，但其對胞內信號通路的影響機制不明。目前我們已建立豬腎冷保存及自體移植模型，豬多樣化的基因背景及與人接近的腎臟結構均使其作為研究HBSP腎臟保護機制模型具有獨特優勢。因此，本課題擬在豬自體腎移植模型中驗證HBSP對移植腎的保護效應，並進一步套用蛋白組學技術探索HBSP在移植前後不同時間節點所引起的腎臟內蛋白表達譜變化，通過對差異蛋白的分析比對篩選出HBSP所作用的胞內信號通路，繪製HBSP動態胞內信號轉導機制網路圖。在此基礎上，我們將在體內運用基因沉默技術siRNA對信號通路上關鍵接頭蛋白的表達進行干預，驗證信號通路，最終深入闡明HBSP對腎臟的保護作用機制，為HBSP的臨床轉化提供理論依據。
結題摘要
缺血再灌注損傷(ischemia reperfusion injury, IRI)作為腎移植中不可避免的病理生理過程，可促進細胞的凋亡和炎症反應，加重移植腎的損傷。我們根據促紅細胞生成素（EPO）3D結構的β螺旋表面中11個胺基酸的序列自主合成了小分子多肽 HBSP (helix B surface peptide) ，我們首先評估了HBSP在體內的腎臟保護作用並闡明了機制。發現HBSP能通過PI3K/Akt通路大幅降低腎臟缺血再灌注損傷所引起的腎小管上皮細胞凋亡和間質炎症。但HBSP半衰期短，極大地限制了其臨床套用前景。為此，我們發明了硫醚環肽 CHBP (cyclic helix B peptide)。大幅提升了穩定性和生物學活性。在腎臟缺血再灌注損傷後的早期及恢復期，我們發現CHBP 能減輕急性損傷，並抑制遠期纖維化。我們檢測由 CHBP引起的不同時點細胞內蛋白表達譜的變化，篩選差異蛋白並進行了驗證，揭示 了CHBP的重要信號通路，並最終繪製了動態網路圖。為了充分模擬臨床，我們採用豬的自體腎移植缺血再灌注損傷模型，研究基因治療對供腎和移植腎的保護作用。我們發現裸露的Caspase-3 siRNA通過腎動脈直接給藥並冷保存24h後對供腎具有顯著的保護作用，但是對移植2天后的移植腎卻沒有保護作用，並且增加了炎症反應和細胞凋亡。我們研究發現，短效的Caspase-3 siRNA治療引起了固有免疫中TLR3、TLR7和PKR的激活，導致機體系統性的反饋調節。為此，我們使用LNA技術修飾的血清穩定型的Caspase-3 siRNA，延長觀察期至移植後2周，發現血清穩定型Caspase-3 siRNA顯著保護了供腎及移植腎，具有巨大的臨床轉化價值。這些結果為今後防治缺血再灌注損傷的器官保護藥物的設計和臨床前研究提供了寶貴的實驗數據。
